Pierce™ Protein L Plus Agarose

La protéine L-agarose Plus Thermo Scientific Pierce est une résine de protéine L et de microbilles d’agarose de haute capacité destinée à différentes méthodes de purification d’anticorps par affinité.

Caractéristiques de la protéine L-agarose Plus :

• Protéine L : la protéine L immobilisée est idéale pour la purification sélective d’anticorps humaines et de souris dotés de chaînes légère kappa
• Résine d’agarose : le support est constitué d’agarose en microbilles réticulées à 6 % (CL-6B), la plus demandée des résines pour les méthodes de purification par affinité des protéines
• Inerte et stable : la méthode de fabrication supérieure immobilise la protéine L par des liaisons covalentes résistantes à la lixiviation et exemptes de charges, générant des liaisons non spécifiques faibles et permettant plusieurs utilisations sans baisse de rendement
• Grande capacité:  cette variété agarose Pierce protéine L “Plus” possède une charge dense de protéine L immobilisée, offrant une capacité de liaison de la résine de 10 à 20 mg d’IgG humaine par ml

L’agarose Pierce Protéine L Plus est une résine polyvalente de haute capacité par affinité pour la purification des isotypes d’IgG mammifères contenant des chaînes légères kappa spécifiques. La protéine L se prête tout particulièrement à l’isolation du Vk I des IgG de souris et des anticorps monoclonaux Vk I, Vk III et Vk IV d’IgG humaine. La résine se compose de protéine L recombinante immobilisée sur des microbilles d’agarose réticulées à 6 % (CL-6B) à l’aide d’une substance chimique stable et résistante au lessivage. Les microbilles d’agarose peuvent être régénérées et réutilisées plusieurs fois lorsqu’elles sont correctement conservées.

La protéine L est une protéine de liaison aux immunoglobulines (36 kDa) issue de la bactérie Peptostreptococcus magnus, aujourd’hui produite par des techniques recombinantes dans la bactérie E. coli. La protéine L a la capacité unique de se lier à travers les interactions de la chaîne légère kappa sans interférer avec le site de liaison de l’antigène d’un anticorps. Ainsi, la protéine L lie les membres de toutes les classes et sous-classes différentes d’immunoglobuline (IgG, IgM, IgA, IgE et IgD) s’ils possèdent des chaînes légères kappa. La protéine L lie également les fragments variables à chaîne unique (scFv) et les fragments Fab. La protéine L lie les types kappa I, III et IV chez l’homme et le type kappa I chez la souris. De plus, la protéine L possède un point isoélectrique (pl) d’environ 4,5 à 4,8.

La protéine L-agarose Plus Pierce est préparée à l’aide de compositions chimiques de couplage Thermo Scientific AminoLink, qui offrent plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles d’immobilisation de ligands. L’immobilisation par AminoLink génère une combinaison entre les monomères de sucre des microbilles d’agarose et les résidus de lysine native sur la protéine A par de simples liaisons d’amides. Contrairement à l’immobilisation typique par bromure de cyanogène (CNBr), la méthode AminoLink n’introduit aucun nouveau groupe chimique qui pourrait causer une liaison non spécifique non désirée et produit une liaison stable, essentiellement irréversible. Résultat : une résine à haute capacité de liaison qui conserve la protéine L immobilisée fonctionnelle sur plusieurs séries de purification d’anticorps.

Propriétés de l’agarose en microbilles réticulées à 6 % (CL-6B) :
• Stabilité du pH : 2 à 14 (court terme) ; 3 à 13 (long terme)
• Taille moyenne des particules : 45 à 165 microns
• Limite d‘exclusion : 10 000 à 4 000 000 daltons
• Débit volumétrique maximal : environ 1 ml/minute (pour une colonne de 1cm de diamètre)
• Vitesse linéaire maximale : 30 cm/heure
• Pression maximale : moins de 25 psi (1,5 bar), définie comme la chute de pression maximale dans une colonne que la résine peut supporter (remarque : Il se peut que la pression manométrique indiquée sur un appareil de chromatographie en phase liquide mesure la pression totale du système plutôt que la chute de pression dans la colonne.)

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