Pierce™ Protein A Plus Agarose

Les kits de centrifugation pour protéine A Plus Thermo Scientific™ NAb™ sont pratiques pour procéder rapidement et à petite échelle à la purification par affinité d’anticorps provenant de divers types d’échantillons. Chaque colonne de centrifugation pré-remplie de résine protéique immobilisée permet une purification rapide de ≥34 mg d’IgG humaine à partir de 0,5 à 2 ml de sérum ou d’un autre échantillon. Chaque kit comprend des tampons et un protocole simplifié pour purifier au moins deux échantillons d’anticorps.

La protéine A Plus-agarose Pierce est une résine d’affinité polyvalente à hautes performances pour la purification des anticorps. Elle est composée de protéine A native purifiée ayant été immobilisée de façon covalente à haute densité sur de l’agarose perlée réticulée à 6 % de haute qualité (CL-6B). Parmi les nombreuses variétés disponibles de résines d’affinité de protéine A immobilisée, cette variété offre la combinaison la plus polyvalente de caractéristiques chromatographiques pour une purification élevée et à haut rendement des IgG à partir d’échantillons sériques mammifères. Les propriétés physiques et chimiques des billes d’agarose conviennent à de nombreux systèmes de purification par affinité.

Caractéristiques de la protéine A Plus-agarose Pierce :

• Protéine A native – la protéine A immobilisée est idéale pour la purification d’IgG polyclonal à partir de sérum humain, de lapin, de porc, de chien ou de chat
• Résine d’agarose – le support est en microbilles d’agarose à 6 % réticulée (CL-6B), la résine la plus populaire pour les méthodes de purification par affinité de protéines
• Inerte et stable – la méthode de fabrication supérieure immobilise la protéine A par des liaisons covalentes résistantes à la lixiviation et exemptes de charges, générant des liaisons non spécifiques faibles et permettant plusieurs utilisations sans baisse de rendement
• Capacité élevée – cette variété “Plus” de l’agarose avec protéine A Pierce possède une charge dense de protéine A immobilisée, offrant une capacité de liaison supérieure à celle de la résine à 34 mg d’IgG/ml humaine par ml (environ 16 à 17 mg d’IgG de souris/ml de résine)

La protéine A est présente dans les parois cellulaires de plusieurs souches de Staphylococcus aureus. Cette protéine de 46,7 kDa est constituée d’une chaîne polypeptidique unique essentiellement dépourvue d’hydrate de carbone. La protéine A native contient quatre sites de liaison à affinité élevée (Ka = 10^8/mol) capables d’interagir avec la région Fc des anticorps de classe IgG chez certaines espèces de mammifères. La fonction de liaison des IgG est optimale lorsque le pH est de 8,2, mais une liaison efficace se produit également dans les tampons neutres et physiologiques (pH 7,0 à 7,6).

La protéine A est une protéine dérivée de bactéries qui se fixe, avec une spécificité et une affinité élevées, au fragment Fc des anticorps, en particulier ceux de la classe IgG. Par rapport à son alternative (protéine G), la protéine A offre la capacité de liaison la plus élevée pour les sous-classes d’IgG de lapins, cochons, chiens et chats. La protéine A a également une capacité de liaison supérieure pour l’IgG humaine, excepté l’IgG3, à laquelle elle se fixe faiblement. La protéine A se fixe faiblement à l’IgG1 de souris. Elle n’est pas recommandée dans la plupart des applications avec cet isotype d’anticorps.

L’agarose Pierce protéine A Plus est préparée à l’aide des compositions chimiques de couplage Thermo Scientific AminoLink, qui présentent plusieurs avantages par rapport aux méthodes traditionnelles d’immobilisation de ligands. L’immobilisation par AminoLink génère une combinaison entre les monomères de sucre des microbilles d’agarose et les résidus de lysine native sur la protéine A par de simples liaisons d’amides. Contrairement à l’immobilisation typique par bromure de cyanogène (CNBr), la méthode AminoLink n’introduit aucun nouveau groupe chimique qui pourrait causer une liaison non spécifique non désirée et produit une liaison stable, essentiellement irréversible. Résultat : une résine à haute capacité de liaison, qui conserve la protéine A immobilisée fonctionnelle sur plusieurs séries de purification d’anticorps.

Propriétés de l’agarose en microbilles réticulées à 6 % (CL-6B) :
• Stabilité du pH : 2 à 14 (court terme) ; 3 à 13 (long terme)
• Dimension moyenne des particules : 45 à 165 microns
• Limite d’exclusion : 10 000 à 4 000 000 daltons
• Débit volumétrique maximal : environ 1 ml/minute (pour une colonne de 1 cm de diamètre)
• Vitesse linéaire maximale : 30 cm/heure
• Pression maximale : moins de 25 psi (1,5 bar), définie comme la chute de pression maximale dans une colonne que la résine peut supporter (remarque : La pression manométrique indiquée d’un appareil de chromatographie en phase liquide peut mesurer la pression totale du système plutôt que la chute de pression dans la colonne.)

Autres données sur le produit
• Purification d’anticorps à l’aide de protéines de liaison d’anticorps

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