Dosage protéique Pierce™ BCA : réactif B

Le réactif B du dosage protéique BCA est un composant du kit de dosage protéique BCA Pierce, un dosage à deux composants, de haute précision, compatible avec les détergents, qui est utilisé pour déterminer la concentration totale de protéines par rapport à un étalon de protéines. Les réactifs BCA Pierce permettent une détermination précise de la concentration des protéines avec la plupart des types d’échantillons rencontrés dans la recherche sur les protéines. Le dosage BCA Pierce peut être utilisé pour évaluer les rendements des lysats de cellules entières, des fractions de colonnes d’affinité, des échantillons de protéines purifiées, ainsi que pour surveiller la contamination des protéines dans les applications industrielles. Par rapport à la plupart des méthodes de liaison des colorants, le dosage BCA est beaucoup moins affecté par les différences de composition des protéines, ce qui permet une plus grande précision de la concentration.

Comparer tous les dosages protéiques BCA disponibles ›

Caractéristiques du kit de dosage protéique Pierce BCA (réactifs A et B) :
• Colorimétrique : estimez visuellement ou mesurez avec un spectrophotomètre étalon ou un lecteur de plaque à 562 nm
• Uniformité : présente moins de variation de protéine à protéine que les méthodes de fixation des colorants (Bradford)
• Compatibilité : non affecté par les concentrations typiques de la plupart des détergents ioniques et non ioniques
• Temps de dosage : incubation de 30 minutes ; beaucoup plus facile et quatre fois plus rapide que les méthodes classiques de Lowry
• Plage de dosage : plage de travail linéaire pour BSA de 20 à 2 000 µg / ml
• Sensibilité : détectez jusqu’à 5 µg / ml avec le protocole amélioré

Fonctionnement du dosage
Le dosage protéique BCA combine la réduction bien connue de Cu²⁺ en Cu¹⁺ par protéine en milieu alcalin avec la détection colorimétrique très sensible et sélective du cation cuivreux (Cu¹⁺) par l’acide bicinchoninique (BCA). La première étape est la chélation du cuivre à l’aide de protéines dans un environnement alcalin pour former un complexe bleu clair. Dans cette réaction, connue sous le nom de réaction du biuret, les peptides contenant trois acides aminés résiduels ou plus forment un complexe chélateur coloré avec les ions cuivreux dans un environnement alcalin contenant du tartrate de sodium et de potassium.

Dans la deuxième étape de la réaction de développement de la couleur, la BCA réagit avec le cation réduit (cuivré) qui s’est formé lors de la première étape. Le produit de la réaction d’une couleur pourpre intense est le résultat de la chélation de deux molécules de BCA et d’un ion cuivreux. Le complexe BCA / cuivre est hydrosoluble et montre une forte absorbance linéaire à 562 nm avec des concentrations croissantes en protéines. Le complexe est environ 100 fois plus sensible (limite inférieure de détection) que la couleur bleu pâle de la première réaction.

La réaction est fortement influencée par quatre résidus d’acides aminés (cystéine, cystine, tyrosine et tryptophane) dans la séquence d’acides aminés de la protéine. Cependant, contrairement aux méthodes de liaison des colorants Coomassie, la structure peptidique universelle contribue également à la formation des couleurs, ce qui permet de minimiser la variabilité provoquée par les différences de composition des protéines.

Produits associés
Dosage protéique BCA Pierce
Réactif A de dosage protéique BCA Pierce
Solide BCA Pierce