Pierce™ Quantitative Peptide Assays & Standards

Les dosages peptidiques quantitatifs colorimétriques ou fluorescents Pierce sont des dosages sur microplaques faciles à lire et à mélanger avec des signaux stables, pour une mesure précise et fiable des échantillons de digestion peptidique. Un étalon de référence de digestion peptidique de haute qualité est fourni séparément ou dans les kits pour la génération de courbes standard linéaires, pour une précision et une reproductibilité améliorées. L’augmentation de la sensibilité, le faible volume de dosage des échantillons et l’étalon de référence inclus sont essentiels pour une mesure précise et robuste des échantillons de digestion peptidique, pour la normalisation de la quantité d’injection d’échantillon pour l’analyse MS.

• Sensible : détectent avec précision aussi peu que 5 µg/ml (fluorométrique) ou 25 µg/ml (colorimétrique) de mélange de peptides
• Reproductible : performances du dosage rigoureusement testées à l’aide de mélanges de digestion peptidique
• Étalon de digestion peptidique robuste : le kit comprend un étalon de digestion peptidique validé pour une reproductibilité de l’analyse quantitative améliorée
• Compatible : fonctionne avec de nombreux réactifs, y compris les réactifs de préparation d’échantillons de spectrométrie de masse et les peptides marqués au TMT (dosage fluorométrique)
• Pratique : format facile de mélange et de lecture et signal stable qui peut être lu en seulement 5 minutes (fluorométrique) ou 15 minutes (colorimétrique)

Dosage peptidique colorimétrique quantitatif Pierce fournit des réactifs BCA modifiés pour la réduction de Cu+2 à Cu+1, un chélateur exclusif optimisé pour la quantification des mélanges de peptides et étalon de référence de digestion de peptides pour la génération de courbes standard linéaires de contrôle. Ce dosage de peptides colorimétriques nécessite une petite quantité d’échantillons (20 µl) et possède une plage de concentration de peptides de 25 à 1 000 μg/ml. Pendant la réaction, le cuivre est tout d’abord réduit par la structure amide des peptides dans des conditions alcalines (réaction de Biuret), puis le chélateur se couple avec le cuivre réduit afin de former un complexe rouge vif (qui absorbe à 480 nm) qui peut être lu en 15 minutes. Le signal produit à partir de cette réaction est 3 à 4 fois plus sensible que le dosage des protéines Micro-BCA pour l’analyse des peptides. Le dosage peptidique colorimétrique est compatible avec les peptides marqués au TMT, mais n’est pas recommandé pour les peptides synthétiques, car le dosage est affecté par la teneur en acides aminés des peptides.

Les réactifs de dosage quantitatif des peptides fluorescents Pierce comprennent un tampon de dosage des peptides, un réactif de marquage des peptides fluorescents et un étalon de dosage de digestion peptidique pour la mesure quantitative des concentrations de peptides. Ce dosage sensible ne nécessite que 10 µl d’échantillon, produit une réponse linéaire avec une augmentation des concentrations de peptides (5 à 1 000 μg/ml) et produit une fluorescence finale stable qui peut être détectée en seulement 5 minutes. Avec ce dosage, les peptides sont spécifiquement marqués à l’extrémité amino-terminale à l’aide d’un réactif fluorescent réactif à l’amine qui n’est pas fluorescent jusqu’à la réaction avec les peptides tryptiques. Les peptides marqués par fluorescence sont détectés sur un lecteur de microplaques (ex390/em475). Ce dosage est adapté à la mesure quantitative de mélanges de digestion de peptides et de peptides synthétiques avec une extrémité amino-terminale non bloquée. Les dosages par fluorescence ne sont pas compatibles avec les peptides marqués au TMT.

L’étalon de dosage de digestion des peptides Thermo Scientific a été conçu comme un étalon de référence à utiliser avec les dosages quantitatifs de peptides fluorométriques et colorimétriques Pierce pour améliorer la reproductibilité et la précision de la quantification des peptides. L’étalon de dosage de digestion des peptides est fourni sous forme de liquide prêt à l’emploi à 1 mg/ml. La protéine de référence a été digérée avec de la trypsine de qualité MS afin de minimiser les clivages ratés. Afin d’assurer une performance constante, l’efficacité de digestion de la protéine est surveillée afin d’assurer la cohérence entre les lots et la qualité est évaluée par comparaison à un étalon de référence.

Applications
• Normalisation des concentrations des échantillons pour les applications quantitatives en aval
• Normalisation des volumes de chargement d’échantillons pour les applications LC, MS et LC-MS
• Mesure de la récupération après les procédures de nettoyage des peptides