Le kit de dosage d’IgG humaine (H+L) Easy-Titer Thermo Scientific contient des microbilles sensibilisées aux anticorps pour mesurer la concentration spécifique d’anticorps au moyen d’une technique de microagglutination simple et rapide, à l’aide de microplaques standards et d’un lecteur de plaques à visibilité UV (spectrophotomètre). Ce kit correspond spécifiquement à l’IgG humaine. Contrairement à un dosage protéique total, il permet de mesurer de manière spécifique la concentration d’anticorps cible dans les échantillons (sérum, plasma, surnageant de culture) contenant d’autres protéines. Il est sensible et n’a besoin de que très faibles volumes d’échantillons. La concentration en anticorps est déterminée par la réponse du dosage (absorbance) par rapport à une courbe standard préparée à l’aide de dilutions d’un échantillon d’anticorps connu (vendu séparément).

Caractéristiques générales des kits de dosage d’anticorps Easy-Titer :

• Spécificité basée sur les anticorps—mesure la concentration de l’anticorps cible dans un échantillon, et non seulement dans les protéines totales ; il n’est pas nécessaire de purifier l’anticorps pour évaluer sa concentration
• Plus rapide et facile que le test ELISA—dosage homogène à trois composants ; temps d’incubation total de 10 minutes
• Aucun équipement spécial n’est nécessaire— utilise un agitateur vortex standard, un pipeteur, une microplaque à 96 puits, un agitateur et un lecteur de plaques (mesure l’absorbance à 340 nm ou 400 nm)
• Sensible— plage de dosage (courbe standard) de 8 à 500 ng/ml ; nécessite un échantillon à 15 à 300 ng/ml pour des résultats optimaux
• Reproductible—coefficient de variation < 5 % ; l’erreur dépend de la technique de dilution et de pipetage
• Étalons d’anticorps vendus séparément—consultez la liste des produits pour connaître les produits proposés ; utilisez tous les étalons d’anticorps avec d’identité appropriée de la cible et la concentration connue (supérieure à 10 µg/ml)
• Kits pour cinq cibles populaires—choisissez un kit spécifique pour une espèce particulière et une classe d’immunoglobuline ; aucune réaction croisée avec d’autres espèces et classes de l’anticorps cible

Les kits d’analyse Easy-Titer détectent et mesurent les anticorps cibles spécifiques à l’aide de l’agglutination de microsphères revêtues (sensibilisées) d’anticorps polyclonaux anti-IgG ou IgM spécifiques. Dans le tampon aqueux approprié (fourni dans le kit), les microsphères liées aux anticorps monodispersées (> 1 µM de diamètre) affichent la plus forte absorptivité (λ maximum) de lumière incidente avec une longueur d’onde (340 nm) égale à environ la moitié de leur diamètre. Lorsque l’échantillon est ajouté, deux microsphères ou plus se lient à chaque cible d’anticorps par l’intermédiaire de leurs anticorps polyclonaux spécifiques revêtus. Cette agglutination réalisée dans des sphères visibles et plus grandes entraîne une diminution proportionnelle de l’absorbance (faible absorbance).

Les dosages typiques de microagglutination dépendent d’un changement de diffusion de la lumière et d’un changement correspondant dans la transmittance, à laquelle l’absorbance est inversement reliée. Les kits de dosage Easy-Titer utilisent un tampon de dilution spécial dont l’indice de réfraction élimine l’effet de diffusion de la lumière sur les microbilles monodispersées pour la longueur d’onde de mesure employée. Pour cette raison, la dilution finale de 10 à 20 fois de l’échantillon à utiliser dans l’analyse doit être réalisée à l’aide du tampon de dilution fourni dans le kit.

Les dosages d’anticorps Easy-Titer sont plus rapides et plus simples à réaliser que les tests ELISA :
• Préparez des étalons (5 à 500 ng/ml) en diluant de l’anticorps purifié dans un kit de tampon de dilution.
• Préparez les échantillons en diluant le volume dans un tampon de dilution pour atteindre la plage de mesure (8 à 500 ng/ml).
• Dans un flacon, mélangez les microbilles pour créer une suspension homogène.
• Avec la pipette, prélevez 20 µlitres de suspension de microbilles et 20 µlitres de chaque échantillon et étalon, et versez-les dans les puits de la microplaque 96 puits.
• Mettez la microplaque en incubation pendant 5 minutes en mélangeant vigoureusement.
• Ajoutez 100 µl de réactif de blocage.
• Mettez la microplaque en incubation pendant 5 minutes en mélangeant vigoureusement.
• Mesurez l’absorbance sur un lecteur de plaques standard (340 ou 405 nm).
• Tracez la courbe standard et interpolez les échantillons pour déterminer la concentration.

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