Pierce™ Far-Western Blot Kit for Biotinylated Proteins

Le kit de transfert Far-Western pour protéines biotinylées Thermo Scientific Pierce permet la détection de transfert Western en gel ou sur membrane de protéines cibles via une interaction avec toute protéine de test marquée à la biotine utilisée comme sonde primaire.

Caractéristiques du kit de transfert Far-Western pour protéines biotinylées :

• Option de détection sur membrane ou sur gel : la détection sur membrane offre une plus grande sensibilité ; la détection sur gel est plus rapide et empêche les problèmes associés à un transfert incomplet ou inefficace
• Alternative non radioactive pour l’analyse far-Western : la chimie fiable et sensible de la biotine / streptavidine-HRP combinée à la détection chimiluminescente offre une alternative pratique et sûre au radiomarquage de la protéine appât
• Plage d’interaction utile : efficace pour les paires d’interactions qui ont des associations de liaison modérées à fortes entre la proie et la protéine-appât biotinylée
• Détection sans anticorps primaires : utilise une protéine biotinylée comme sonde, éliminant ainsi le besoin d’anticorps primaires ou même d’avoir une connaissance préalable des identités protéiques cibles
• Compatible avec des gels de SDS-PAGE et natifs : possibilité de sonder des protéines proies dans un environnement plus natif car les systèmes réduits ou dénaturants ne permettent pas toujours d’observer l’interaction souhaitée
• Liaison non spécifique réduite : les systèmes biotine / streptavidine-HRP démontrent une liaison plus spécifique par rapport aux anticorps dirigés contre la protéine appât
• Compatible avec la coloration protéique : les gels peuvent être utilisés pour une coloration des protéines totale après l’étape de détection par chimiluminescence dans gel, ce qui élimine la nécessité d’utiliser deux gels

Ce kit de transfert far-Western fournit les réactifs et le protocole nécessaires pour sonder les protéines cibles en raison de leur interaction avec un partenaire de liaison spécifique que le chercheur fournit sous forme purifiée et biotinylée. Le kit réussit l’analyse des interactions protéine-protéine dans lesquelles les protéines cibles (proies) peuvent être liées après leur séparation par électrophorèse sur gel. Le kit comprend des réactifs et des procédures d’analyse et de détection chimiluminescente avec des transferts ou directement à partir de mini gels.

Comprend :
• Conjugué de streptavidine-HRP, tampons de dilution et de lavage, solutions de substrats chimiluminescents et feuilles de cellophane pour mini gels

Applications :
• Découverte de l’interaction des protéines : recherche et sélection de protéines dans les lysats cellulaires qui ont une affinité de liaison avec la protéine biotinylée purifiée
• Confirmation de l’interaction protéique : caractérise et identifie la présence d’interactions de liaison natives ou hors cible impliquant une protéine biotinylée donnée et des échantillons particuliers

Le transfert Far-Western consiste à rechercher d’abord des cibles avec une protéine d’interaction putative plutôt qu’un anticorps primaire. La méthode est appelée transfert far-Western car les anticorps primaires sont utilisés de manière secondaire pour détecter la sonde d’interaction primaire plutôt que la protéine cible. Le kit de transfert Far-Western pour protéines biotinylées Pierce élimine l’utilisation d’anticorps. La sonde primaire (c.-à-d. la protéine d’appât biotinylée fournie par le chercheur) est ensuite détectée par le conjugué de streptavidine-HRP, dont l’activité est visualisée par réaction avec un substrat chimiluminescent très sensible.