PEG12-SPDP (PEGylated, long-chain SPDP crosslinker)

Le PEG12-SPDP Thermo Scientific Pierce est un agent de réticulation multifonctionnel pour la conjugaison de protéines via des réticulations amine-à-amine ou amine-à-sulfhydryle qui contiennent un groupe de polyéthylène glycol (PEG) de 12 unités et une liaison de disulfure réductible (clivable).

Caractéristiques du PEG12-SPDP :

• Conjugaison efficace des amines :L’ester NHS fournit une conjugaison efficace aux lysines, aux extrémités N-terminales de peptides et autres amines primaires
• Conjugaison réversible de sulfhydryle : le groupe pyridyldithiol permet la liaison disulfure avec des cystéines réduites et d’autres groupes sulfhydryle, fournissant une liaison stable mais clivable
• Polyéthylène glycol : les groupes PEG sont souples, non immunogènes, hydrophiles, et améliorent souvent la solubilité des molécules fixées
• Bras espaceur : connecte les amines primaires et les cibles sulfhydryles à des distances allant jusqu’à 54,1 angströms ; par rapport au PEG4-SPDP (25,7 angströms)

Les réactifs de type SPDP ont un ester de N-hydroxysuccinimide (NHS) réactif aux amines à une extrémité et un groupe 2-pyridyldithiol réactif au sulfhydryle à l’extrémité opposée. Le PEG12-SPDP possède un bras espaceur à 12 unités en polyéthylène glycol, qui confère une plus grande solubilité à l’agent de réticulation et aux protéines liées par rapport aux agents de réticulation possédant uniquement des espaceurs d’hydrocarbures. Les réactifs pyridyldithiol produisent des liaisons contenant du disulfure qui peuvent être clivées avec des agents réducteurs tels que le dithiothréitol (DTT). Les expériences de réticulation avec les réactifs SPDP ne se limitent pas à celles impliquant des protéines. Toutes sortes de molécules comportant des amines primaires et des groupes sulfhydryle peuvent être modifiées ou réticulées à l’aide d’un réactif SPDP.

La conjugaison des réactifs SPDP aux réactions des amines primaires via l’ester NHS est généralement effectuée à un pH de 7 à 8 dans un tampon phosphate, carbonate / bicarbonate ou borate. D’autres tampons qui ne contiennent pas d’amines primaires (ou de thiols ou de réactifs réducteurs de disulfure ; voir la discussion sur la réactivité du sulfhydryle) sont également efficaces.

La réaction avec le groupe pyridyldithio réactif au sulfhydryle peut être effectuée pendant (simultanément) ou après la réaction amine, et elle se produit de manière optimale à un pH de 7 à 8. La réaction entraîne un déplacement de la pyridine-2-thione, dont la concentration peut être déterminée en mesurant l’absorbance à 343 nm. Les tampons de réaction doivent être exempts de thiols et d’agents réducteurs de disulfure jusqu’à ce qu’une extinction ou une réduction du 2-pyridyldithiol soit souhaitée.

Références des produits :
Guide d’application des agents de réticulation : recherche de références bibliographiques récentes pour ce produit

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