SDAD (NHS-SS-Diazirine) (succinimidyl 2-((4,4'-azipentanamido)ethyl)-1,3'-dithiopropionate)

Le réactif SDAD (NHS-SS-diazirine) Pierce Thermo Scientific associe des chimies de photoréaction éprouvées basées sur un ester NHS et la diazirine pour conjuguer des molécules contenant des amines avec presque tout autre groupe fonctionnel via une activation par lumière UV à ondes longues. Un bras espaceur de 13,5 Å contenant une liaison disulfure clivable sépare les deux groupes photoréactifs.

Caractéristiques du réactif SDAD (NHS-SS-diazirine) :

• Perméable à la membrane : convient à la réticulation intracellulaire in vivo
• Hétérobifonctionnel : le groupe ester NHS réagit avec les amines primaires à un pH de 7 à 9 pour former des liaisons amides covalentes ; le groupe diazirine (azipentanoate) réagit efficacement avec n’importe quelle chaîne latérale d’acides aminés ou structure peptidique lors de l’activation avec de la lumière UV à ondes longues (330 à 370 nm)
• Contrôlable : la réticulation chimique en deux étapes est activée à l’aide de lampes à UV de laboratoire conventionnelles
• Facile à utiliser : ces agents de réticulation sont photostables dans des conditions d’éclairage de laboratoire typiques, il n’est donc pas nécessaire d’effectuer des expériences dans l’obscurité
• Mieux que les azotures d’aryle : le groupe diazirine photoréactif a une meilleure photostabilité sous une lumière normale que les groupes azoture de phényle des agents de réticulation photoréactifs traditionnels, mais le groupe diazirine est activé plus efficacement par la lumière UV à ondes longues

Les réactifs de succinimidyl-diazirine (SDA) sont une nouvelle classe d’agents de réticulation qui associent une chimie réactive aux amines éprouvée à une photochimie innovante et efficace basée sur la diazirine pour conjuguer des molécules contenant des amines à presque tous les autres groupes fonctionnels. Les réticules SDA comprennent six composés qui sont différents de par les longueurs de bras espaceurs, la capacité à cliver les protéines réticulées et la présence ou l’absence d’un groupe chargé pour la perméabilité membranaire. La réticulation des protéines est une technique importante utilisée pour comprendre la structure protéique et stabiliser les interactions protéine-protéine. Ces réactifs SDA étendent l’efficacité et la gamme des interactions qui peuvent être explorées par cette approche.

Les agents de réticulation réactifs aux amines ou au sulfhydryle bifonctionnels typiques nécessitent que des groupes d’acides aminés spécifiques (par exemple, la lysine ou la cystéine) se trouvent à la bonne distance sur les deux protéines pour capturer les interactions protéiques. Les agents de réticulation SDA contournent cette limitation en permettant un marquage spécifique d’une protéine à l’aide de l’ester N-hydroxysuccinimide (NHS) réactif à l’amine, suivi d’une réticulation activée par UV via la fraction de diazirine pour n’importe quelle chaîne latérale d’acides aminés ou structure peptidique d’une seconde protéine. Les agents de photoréticulation à base de diazirine ont une meilleure photostabilité que les agents de photoréticulation à base d’azoture de phényle et sont facilement activés avec une lumière UV à ondes longues (330 à 370 nm).

Plusieurs agents de réticulation diazirine disponibles
Les dérivés de la diazirine ester NHS (SDA, LC-SDA et SDAD) n’ont pas de groupe chargé et sont perméables à la membrane. Cette propriété les rend idéales pour les conjugaisons intracellulaires et intramembranaires. En revanche, les sulfo-SDA, sulfo-LC-SDA et sulfo-SDAD contiennent des groupes de sulfates chargés négativement qui améliorent leur solubilité dans l’eau et réduisent la perméabilité de la membrane cellulaire, ce qui leur permet d’utiliser la réticulation des protéines extracellulaires. Les SDAD et sulfo-SDAD ont également une liaison disulfure dans l’espaceur qui peut être clivée avec des agents réducteurs.

• Variétés de bras espaceur courts (3,9 Å) et longs (12,5 Å)
• Variétés perméables aux membranes (NHS) et imperméables (sulfo-NHS)
• Variétés non clivables et clivables (espaceur disulfure)

Produits associés
Sulfo-SDAD (Sulfo-NHS-SS-Diazirine)
SDA (NHS-Diazirine)
LC-SDA (NHS-LC-Diazirine)