ADN polymérase AmpliTaq Gold™ avec tampon Gold et MgCl2
ADN polymérase AmpliTaq Gold&trade; avec tampon Gold et MgCl<sub>2</sub>
Applied Biosystems™

ADN polymérase AmpliTaq Gold™ avec tampon Gold et MgCl2

L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ est une version chimiquement modifiée de l’ADN polymérase AmpliTaq™ nécessitant une activation thermique. Fonctions de cetteAfficher plus
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L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ est une version chimiquement modifiée de l’ADN polymérase AmpliTaq™ nécessitant une activation thermique. Fonctions de cette enzyme :

• Enzyme à démarrage à chaud chimique automatisée pour une meilleure spécificité, une sensibilité accrue et un meilleur rendement
• L’activation thermique progressive améliore la sensibilité des amplifications à faible nombre de copies
• La PCR multiplex réussie permet un gain de temps et une économie de réactifs
• Comprend le tampon GeneAmp™ 10X PCR Gold avec MgCl2

Activation du démarrage à chaud
L’enzyme modifiée est fournie dans un état inactif. Sous l’effet d’une activation thermique, l’agent modificateur est libéré de façon permanente, régénérant ainsi l’enzyme active. L’amplification par PCR à démarrage à chaud qui en résulte offre une sensibilité, une spécificité et un rendement accrus par rapport aux techniques PCR classiques.

Spécificité accrue, rendement plus élevé
L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ peut être activée partiellement ou complètement à une étape de chaleur pré-PCR ou peut être activée lentement et de manière progressive pendant les étapes de dénaturation du cycle thermique. Lors du thermocyclage, l’enzyme active est libérée progressivement, avec ou sans étape d’activation thermique immédiate limitée, de façon à s’aligner sur la concentration du modèle et à augmenter la spécificité. Les réactifs n’étant pas perdus dans la formation de produits indésirables, le rendement de produits spécifiques est ainsi augmenté. L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ est une enzyme chimique à démarrage à chaud ; il n’existe donc aucun risque de contamination biologique.

Le tampon GeneAmp 10X PCR Gold est formulé pour permettre une activation flexible et efficace de l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™, résultant en une amplification par PCR robuste et hautement spécifique. La force ionique et le pH du tampon GeneAmp™ 10X PCR Gold ont été optimisés pour fournir une température et une plage de temps d’activation plus larges lorsqu’ils sont utilisés en conjonction avec l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™.

ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360 pour des performances supérieures
L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360 est également disponible pour des performances PCR encore meilleures. Par rapport à l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™, l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360 est purifiée selon un processus de séparation exclusif supplémentaire destiné à éliminer les séquences d’ADN bactérien contaminé de la préparation enzymatique. Lorsqu’elle est utilisée en combinaison avec le tampon 360 Gold Buffer, et grâce à ses capacités de démarrage à chaud, cette enzyme ultra-pure permet de réduire les faux-positifs, d’amplifier les séquences cibles à faible concentration et d’accélérer l’amplification de toute une série de modèles. Également fourni avec ce produit : une séquence activatrice 360 GC permettant d’exécuter les modèles difficiles à forte concentration en GC.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Activité exonucléasique5’ à 3’
Fidélité (par rapport à Taq)1 X
FormatTube
Hot StartFonctionnalité Hot-Start (démarrage à chaud) intégrée
Nbre de réactions20 000 réactions
En surplomb3’-A
PolyméraseADN polymérase AmpliTaq Gold
Type de produitADN polymérase
Quantité25 000 unités
Format de réactionComposants séparés
Conditions d’expéditionDry Ice
Taille (produit final)5 kb ou moins
Matériau de départADN
Concentration5 U/μl
À utiliser avec (application)Hot-start PCR
GC-Rich PCR PerformanceFaible
Vitesse de réactionÉtalon
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Contient 5 boîtes au total, comprenant chacune les éléments suivants :
• 5 tubes (200 µl à 5 U / µl) d’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ (250 unités au total par tube)
• 20 tubes (1,5 ml) de tampon GeneAmp™ 10X Gold (150 mM de Tris-HCl, pH 8,0, 500 mM de KCl)
• 20 tubes (1,5 ml) de chlorure de magnésium 25 mM.

Conserver entre -15 et -30 °C.

Foire aux questions (FAQ)

What is the difference between AmpliTaq Gold polymerase and Platinum Taq polymerase?

Both AmpliTaq Gold and Platinum Taq are hot-start enzymes that allow you to set up your reactions on the benchtop without the need for ice. AmpliTaq Gold is a chemically-modified hot-start enzyme, provided in an inactive state. Heat activates the enzyme, with full activity after 10 min at 95 degrees C. Platinum Taq is an antibody-mediated hot-start enzyme. The anti-Taq antibodies bind and inactivate the enzyme, until the heat denaturation step of the PCR reaction (30 sec to 2 min), which activates the enzyme.

When using AmpliTaq Gold DNA polymerase, under what conditions would one choose a two-temperature vs. three-temperature PCR?

A two-temperature PCR is commonly used when the primer annealing temperatures are above 60 degrees C. Use a three-temperature PCR when the templates have high G+C content and/or secondary structure, or desired primer annealing temperatures are below 60 degrees C. Please consult the Product Insert for more information on the use of AmpliTaq Gold DNA polymerase.

Is there anything to prevent AmpliTaq Gold DNA polymerase from extending from the 3’ end of a TaqMan probe in a 5’ nuclease assay?

Yes. There is a phosphate group on the 3' end of all TaqMan probes that prevents such extension.

How does AmpliTaq Gold DNA Polymerase differ from AmpliTaq DNA Polymerase?

AmpliTaq Gold DNA Polymerase is a modified form of AmpliTaq DNA Polymerase that contains a proprietary chemical (or so-called hot start molecule) bound to the enzyme's active site. In order to activate the AmpliTaq Gold DNA Polymerase fully, we recommend an initial activation step of 95 degrees C for 10 min when using GeneAmp 10X PCR Buffer I and/or GeneAmp 10X PCR Buffer II and Mg in one of our thermal cyclers. When using GeneAmp 10X PCR Gold Buffer, activation time can be reduced to 5 minutes. Once activation is complete, you can proceed with your standard PCR cycling program (denaturing, annealing, extension, etc).

Does AmpliTaq Gold DNA Polymerase contain exonuclease (proofreading) activity?

No, AmpliTaq Gold DNA polymerase does not contain proofreading activity, however fidelity in PCR amplifications utilizing this enzyme may be improved. High fidelity can be achieved by: 1. Decreasing the final concentration of each nucleotide to 40-50 uM. 2. Using the lowest MgCl2 concentration possible. 3. Using less enzyme. 4. Decreasing extension times. 5. Using the highest annealing temperature possible. 6. Using as few cycles as possible.

Citations et références (2)

Citations et références
Abstract
Approaches to determine expression of inflammatory cytokines.
Authors:Amsen D, de Visser KE, Town T,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:19347295
'There is an increasing awareness of the role of inflammation in cancer. Immune responses can limit the growth of some tumors, but paradoxically, may promote the growth of others. Cytokines are critical mediators of both the innate and the adaptive immune responses. In this chapter, we will describe several methods ... More
A phase 1 study of a vaccine targeting preferentially expressed antigen in melanoma and prostate-specific membrane antigen in patients with advanced solid tumors.
Authors:Weber JS, Vogelzang NJ, Ernstoff MS, Goodman OB, Cranmer LD, Marshall JL, Miles S, Rosario D, Diamond DC, Qiu Z, Obrocea M, Bot A,
Journal:J Immunother
PubMed ID:21760528
Preferentially expressed antigen in melanoma (PRAME) and prostate-specific membrane antigen (PSMA) are tumor-associated antigens implicated in cellular differentiation, genetic stability, and angiogenesis. MKC1106-PP is an immunotherapeutic regimen cotargeting PRAME and PSMA, comprised of a recombinant plasmid (pPRA-PSM encoding fragments derived from both antigens) and 2 peptides (E-PRA and E-PSM derived ... More