ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360
Applied Biosystems™

ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360

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L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360 Applied Biosystems™, lorsqu’elle est utilisée avec un tampon AmpliTaq Gold 360 amélioré et un activateur 360 GC en option, amplifie une vaste gamme de contextes de séquence d’ADN. L’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360 offre une couverture de 360° pour une gamme complète de cibles.
* Optimisée pour la gamme la plus large de cibles : du quotidien au difficile
* Sensibilité, spécificité et rendement inégalés
* Amplification robuste des séquences riches en GC avec l’activateur 360 GC leader sur le marché
* Atteint les données de séquençage de la plus haute qualité

Optimisé pour des cibles faciles et difficiles

Les cibles difficiles comprennent les amplicons riches en AT, en GC, les amplicons formant des amorces dimères, les répétitions d’homopolymères et les amplicons qui posent des problèmes de séquençage. Les amplicons qui exigeaient auparavant des enzymes et des conditions de réaction spécialisés peuvent désormais être amplifiés de manière reproductible avec un seul réactif dans des conditions normalisées (Illustration 1). L’analyse comparative compétitive sur plus de 40 amplicons distingue AmpliTaq Gold™ 360 comme l’enzyme la plus performante, garantissant ainsi la plus grande probabilité de succès pour l’amplification des cibles quotidiennes et exigeantes (tableau 1).
Comme le montre la figure 1, les régions riches en GC sont particulièrement mal amplifiées avec les ADN polymérases concurrentes et l’AmpliTaq Gold d’origine, tandis qu’AmpliTaq Gold 360 offre une amplification réussie et robuste.

Optimisé pour la PCR Hot Start à démarrage à chaud

L’ADN polymérase AmpliTaq Gold 360 offre la même spécificité à démarrage à chaud que l’ADN polymérase AmpliTaq Gold. Une étape d’incubation à haute température est nécessaire pour activer l’ADN polymérase AmpliTaq Gold, ce qui garantit que l’enzyme active n’est générée qu’à des températures où l’ADN est entièrement dénaturé et lorsque les amorces ne sont pas hybridées.
Lorsque la polymérase est ajoutée au mélange de réaction à température ambiante, l’extension de l’amorce ne se produit pas car l’enzyme est inactivée. Toutes les erreurs d’amorçage de faible gravité susceptibles de s’être produites ne seront pas étendues de façon enzymatique et ne seront pas amplifiées. Par conséquent, la configuration de la PCR peut être effectuée à température ambiante sans souci d’extension à des sites mal amorcés. La quantité d’ADN polymérase AmpliTaq Gold 360 augmente dans la réaction lentement avec chaque numéro de cycle, et le rendement de produits spécifiques augmente sans accumulation des produits non spécifiques, notamment des dimères d’amorces. La figure 1 illustre une excellente spécificité pour un large éventail de cibles et est résumée dans la figure 2. Cette excellente spécificité permet un multiplexage et la discrimination allélique.
La quantité d’ADN polymérase AmpliTaq Gold 360 augmente dans la réaction lentement avec chaque numéro de cycle, et le rendement de produits spécifiques augmente sans accumulation des produits non spécifiques, notamment des dimères d’amorces. La figure 1 illustre une excellente spécificité sur une vaste gamme de cibles et est résumée dans les figures 2A et B. L’excellente spécificité facilite le multiplexage et la discrimination allélique.

Sensibilité et longueur d’amplification supérieures

Par rapport à l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ d’origine, l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™ 360 est purifiée par un procédé de séparation exclusif supplémentaire pour éliminer les séquences d’ADN bactérien contaminantes de la préparation enzymatique. Lorsqu’elle est utilisée en combinaison avec le tampon 360 Gold, et grâce à ses capacités de démarrage à chaud, cette enzyme ultra-pure permet de réduire les résultats faussement positifs, d’amplifier les séquences cibles à faible concentration et d’accélérer l’amplification de toute une série de modèles, y compris ceux provenant de génomes bactériens et humains.
L’ADN polymérase AmpliTaq Gold 360 amplifie efficacement les cibles présentes à un faible nombre de copies (figure 3), même en présence de concentrations élevées d’ADN complexe, ce qui la rend particulièrement adaptée à la détection des agents pathogènes à faible copie et à l’amplification des cibles à partir d’échantillons d’ADN dégradés. L’extrême pureté de l’enzyme contribue à sa sensibilité inégalée. L’ADN polymérase AmpliTaq Gold 360 amplifie de façon efficace et reproductible les longues séquences (jusqu’à 5 Kb). La figure 4 illustre l’amplification de PCR robuste de longues séquences d’ADN humain et plasmidique.
 

Remarque :

Consultez le manuel de l’utilisateur ou la notice pour obtenir des informations sur la licence restreinte et sur la marque.
Utilisation exclusivement réservée à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Activité exonucléasique5’ à 3’
Fidélité (par rapport à Taq)1 X
FormatTube
Hot StartFonctionnalité Hot-Start (démarrage à chaud) intégrée
Nbre de réactions800 réactions
En surplomb3’-A
PolyméraseADN polymérase AmpliTaq Gold 360
Type de produitADN polymérase
Quantité1 000 unités
Format de réactionComposants séparés
Conditions d’expéditionHomologué pour des expéditions à température ambiante ou sur glace mouillée
Taille (produit final)5 kb ou moins
Matériau de départADN
Concentration5 U/μl
À utiliser avec (application)Hot-start PCR
GC-Rich PCR PerformanceÉlevé
Vitesse de réactionÉtalon
Unit SizeEach
Contenu et stockage
• 1 x 1 000 U d’ADN polymérase AmpliTaq Gold 360
• 4 x 1,5 ml de tampon AmpliTaq Gold 360, 10X
• 4 x 1,5 ml de solution de MgCl2 à 25 mM
• 4 x 1,5 ml de séquence activatrice 360 GC

Conserver entre -15 et -25°C.

Foire aux questions (FAQ)

My oligonucleotide does not appear to be the right length when I checked by gel electrophoresis. Why is this?

Oligos should be run on a polyacrylamide gel containing 7 M urea and loaded with a 50% formamide solution to avoid compressions and secondary structures. Oligos of the same length and different compositions can electrophorese differently. dC's migrate fastest, followed by dA's, dT's, and then dG's. Oligos containing N's tend to run as a blurry band and generally have a problem with secondary structure.

The primers I am using worked for PCR initially, but over time, have stopped working. What happened?

Primers should be aliquoted for single use before PCR set-up. Heat just the aliquoted primers to 94 degrees for 1 min. Quick chill the primer on ice before adding to the PCR reaction. Some primers may anneal to themselves or curl up on themselves.

I don't see a pellet in my oligo tube order. Should I ask for a replacement?

The drying method dries the primer in a thin layer along the sidewalls of the tube instead of the bottom, therefore a pellet is not always visible and should still be ready to use.

There is a ball-shaped pellet at the bottom of my oligo tube. What is this and can I still use my oligo?

If the oligo was overheated, it will appear as a “ball”-shaped pellet attached to the bottom of the tube. This should not affect the quality of the oligo, and the oligo should be readily soluble in water.

There is a green color in my lyophilized oligo. Can I still use it?

If an oligo appears green in color, this is most likely due to ink falling into the tube. The oligo should still be fully functional. The color can be removed by doing an ethanol precipitation.