Le kit Ambion™ Power SYBR™ Green Cells-to-C_T™ est une méthode rapide, facile et robuste qui permet de passer directement des cellules en culture aux résultats de PCR en temps réel. Une technologie de pointe de lyse cellulaire et de stabilisation d’ARN élimine complètement le processus de purification d’ARN laborieux et chronophage. Le kit contient suffisamment de réactifs pour 400 réactions. Le kit Power SYBR™ Green Cells-to-C_T™ est alimenté par l’ADN polymérase AmpliTaq Gold™, LD, qui fournit les niveaux de spécificité les plus élevés avec la PCR en temps réel standard.

• Comprend des réactifs optimisés pour fonctionner efficacement dès sa sortie de l’emballage
• La technologie Cells-to-C_T™ simple et efficace permet la préparation d’échantillons à température ambiante en seulement 7 minutes, y compris le traitement DNase
• Précision validée, reproductibilité exceptionnelle et sensibilité maximale de 10 à 100 000 cellules par échantillon ; résultats équivalents à ceux de l’ARN purifié

Valeur extraordinaire
Le kit comprend des réactifs pour la préparation d’échantillons intégrés dans un flux de travail complet et optimisé d’expression génétique, y compris des réactifs de transcription inverse et un Master Mix PCR de haute performance avec SYBR™ Green.

Facilité extraordinaire
Le protocole commence par une procédure de préparation simple d’échantillons de 7 minutes. D’abord, les cellules sont nettoyées dans du PBS, puis lysées en solution pendant 5 minutes à température ambiante ; le traitement par DNase peut être réalisé simultanément. La réaction de lyse est arrêtée et l’échantillon est alors prêt pour la transcription inverse ou la conservation à –20°C pendant 5 mois maximum. Étant donné que les échantillons peuvent être traités directement dans des plaques de culture (96 ou 384 puits), la manipulation des échantillons et le risque de perte des échantillons ou d’erreur de transfert sont minimisés, ce qui contribue à une reproductibilité plus élevée. Après la préparation de l’échantillon, une partie du lysat cellulaire est ajoutée à une réaction RT suivie d’une PCR en temps réel à l’aide du mélange maître inclus.

Performances extraordinaires
Pour démontrer les performances du kit, des expériences répliquées ont été effectuées à l’aide de la purification d’ARN traditionnelle et de l’analyse PCR en temps réel, ou du kit Power SYBR™ Green Cells-to-C_T™. Le kit montre des performances équivalentes aux résultats obtenus à l’aide d’ARN purifié pour l’analyse de 10 à 100 000 cellules. De plus, la sensibilité, l’efficacité et la plage dynamique ont été supérieures aux kits de lysat concurrents. Les échantillons préparés avec le kit ont été testés du point de vue de leur compatibilité avec diverses plateformes de PCR en temps réel, notamment celles d’Applied Biosystems™, Roche et Bio-Rad.

Produit accessoire :
le kit de contrôle SYBR™ Green Cells-to-C_T™ (n° cat. 4402959) contient un ensemble de contrôle et d’amorces d’ARN Xeno™ et est recommandé pour surveiller l’efficacité de la lyse cellulaire et de l’inhibition de l’amplification dans les réactions Cells-to-C_T™.