Le système d’immunodosage d’AMP cyclique à 96 puits cAMP-Screen Direct™ permet la détermination ultrasensible des niveaux d’AMP cyclique (cAMP) dans les lysats cellulaires. Cet immunodosage chimiluminescent compétitif est formaté avec une flexibilité maximale pour permettre des ajouts manuels de réactifs ou un traitement automatisé à haut débit. Le dosage de l’AMPc utilise le substrat de CSPD™ chimiluminescent hautement sensible avec l’Enhancer Sapphire-II™ qui est déclenché par un conjugué enzymatique composé de l’AMPc lié à la phosphatase alcaline (cAMP-AP). La formulation du substrat chimiluminescent / séquence activatrice est un réactif prêt à l’emploi qui génère une émission de lumière luminescente soutenue à partir de 30 minutes après l’ajout. Ce dosage est principalement utilisé dans le dépistage secondaire et la recherche préclinique, où la sensibilité et l’absence de faux positifs sont essentielles.

• La sensibilité la plus élevée de tout dosage de cAMP disponible dans le commerce
• Plusieurs heures de temps de lecture avec peu ou pas de dégradation du signal
• Un protocole simple avec des cellules cultivées directement sur la plaque d’essai
• Utile pour une large gamme d’études d’activation de récepteur

Haute sensibilité et plusieurs heures de temps de luminescence fixe
Le dosage chimiluminescent est conçu pour fournir la plus haute sensibilité de tout dosage de cAMP disponible dans le commerce. Il est possible de détecter jusqu’à 60 femtomoles de cAMP. Le dosage possède une large plage dynamique, détectant de 0,06 à 6 000 picomoles de cAMP sans dilution d’échantillons ni manipulation comme l’acétylation. Ceci est particulièrement utile dans les essais cellulaires lors de la mesure de la stimulation et/ou de l’inhibition d’agonistes ou d’antagonistes couplés aux Gs ou Gi. La précision intra-dosage pour les échantillons en double est généralement inférieure ou égale à 5 %. Une fois que la formulation du substrat/de l’activateur atteint le signal de luminescence, la plaque peut être lue pendant des heures, avec peu ou pas de dégradation du signal. Ceci est utile dans les écrans où plusieurs plaques sont comparées les unes avec les autres. De plus, le dosage présente une réactivité croisée exceptionnellement faible avec d’autres nucléotides cycliques ou contenant de l’adénosine.

Pour les études d’activation des récepteurs
Le système cAMP-Screen Direct™ est conçu pour la quantification de l’AMPc cellulaire pour les dosages fonctionnels de l’activation des récepteurs. Le dosage a été utilisé avec des lignées cellulaires établies pour les mesures fonctionnelles avec des récepteurs endogènes, des lignées cellulaires avec des récepteurs de ligand exogènes sur la surface cellulaire, les cultures cellulaires primaires et les tissus en réponse au traitement avec les ligands appropriés. En outre, il a été utilisé pour la caractérisation des récepteurs, l’identification des ligands des récepteurs orphelines et la caractérisation de nouveaux récepteurs chimériques. Le dosage peut être utilisé pour le criblage à haut débit pour les composés qui stimulent ou interfèrent avec ces voies de transduction de signal.

Un protocole simple — Aucun transfert de lysat requis
Le dosage suit un protocole simple. Les cellules sont ensemencées en plaques, mises en culture et traitées avec des composés d’essai comme désiré. Les lysats cellulaires sont préparés en présence ou en absence de milieu de culture. Les lysats sont incubés avec un conjugué cAMP-AP et un anticorps anti-cAMP dans une microplaque revêtue ; les complexes immunitaires qui en résultent sont capturés dans la plaque. Dans les échantillons sans AMPc, tout le conjugué AMPc-AP est capturé sur la surface enduite, ce qui donne un signal élevé. En présence d’AMPc, la quantité de conjugué AMPc-AP capturée diminue en raison de la compétition pour la liaison avec l’AMPc non marqué, ce qui entraîne une réduction du signal ; la réduction du signal est proportionnelle à la quantité d’AMPc présente dans le lysat cellulaire. Après lavage pour éliminer le cAMP-AP non lié, le substrat chimiluminescent est ajouté et le signal de luminescence résultant est mesuré dans un luminomètre.

Ce système AMPc-Screen Direct™ présente les mêmes avantages que le système AMPc-Screen™, mais élimine également le besoin de transférer les lysats cellulaires d’une plaque de culture tissulaire vers les microplaques préenduites, car les cellules peuvent être cultivées directement dans les microplaques. Ceci offre une meilleure précision de dosage avec une phase de transfert de moins. De nombreux types de cellules différents ont été cultivés avec succès sur les microplaques préenduites, qui ont également un fond transparent pour permettre de surveiller les cellules.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Non utilisé à des fins thérapeutiques ou diagnostiques humaines ou animales.