Pierce™ Conjugate Purification Kit

Le kit de purification de conjugués Thermo Scientific Pierce est un système de chromatographie d’affinité unique pour purifier les anticorps conjugués de la peroxydase de raifort (HRP) ou de la phosphatase alcaline (AP) provenant d’une enzyme non réagissant après marquage.

Caractéristiques du kit de purification de conjugués :

• Spécifique à l’IgG :la procédure est conçue pour l’élimination des enzymes HRP ou AP des anticorps IgG ; non pour une utilisation avec des fragments IgM, IgY, Fab ou des conjugués streptavidine
• Kit complet :inclut des tampons d’affinité, activateur et élution, colonne de dessalage et tampons de stockage pour les conjugués HRP et AP
• Haute capacité :le kit-colonne à usage unique est conçu pour la purification de 0,5 à 50 mg de conjugué d'anticorps dissous dans une solution saline tamponnée Tris
•. Améliore les dosages : en éliminant l’enzyme non conjuguée des conjugués d’anticorps et améliore les performances supérieures des immunodosages

Ce kit de purification de conjugués est conçu pour éliminer l’excédent d’enzyme HRP non conjuguée ou d’enzyme Alk-Phos des anticorps marqués (IgG) après avoir effectué des réactions de conjugaison anticorps-enzyme. La colonne de résine d’agarose chélate-métal se lie aux conjugués d’IgG-enzyme mais permet à l’enzyme non conjuguée (HRP ou AP) de passer à travers. Un tampon d’élution doux et non dénaturant récupère le conjugué IgG-HRP ou IgG-AP entièrement actif. Les colonnes de dessalage incluses échangent le conjugué purifié dans n’importe quel tampon de choix, prêt à l’emploi dans diverses méthodes d’immunodétection.

Dans cette procédure de kit, l’agarose chélatée au nickel lie l’IgG à travers un cluster riche en histidine sur la région Fc aux jonctions des domaines Cγ2 et Cγ3, qui est hautement conservé dans tous les IgG de mammifères. Les IgG purifiées provenant de mouton, de souris, de chèvre, de rat et de lapin se lient à la résine chélatée au nickel. Les conjugués enzymatiques avidine ou streptavidine ne peuvent pas être purifiés par cette méthode car ils ne se lient pas à l’agarose chélatée au nickel. En outre, ce kit ne peut pas être utilisé pour purifier les anticorps du sérum car d’autres protéines sériques se lient également à la colonne de nickel.

L’élimination de l’enzyme non conjuguée à l’aide de ce kit peut améliorer les résultats des dosages. L’augmentation de la sensibilité des dosages, des lavages plus courts et des temps d’incubation, ainsi qu’un rapport signal-bruit élevé peuvent être obtenus plus facilement lorsque l’enzyme libre est absente du système. De plus, la colonne concentre les échantillons, ce qui facilite l’optimisation des dosages lors de l’utilisation de conjugués dans des solutions diluées.