Uracile-ADN glycolase, thermolabile

L’uracile-ADN glycosylase retire l’uracile de l’ADN contenant du dUTP en clivant la liaison N-glycosidique entre la base de l’uracile et la base essentielle du sucre. Ce clivage génère des sites apyrimidiniques sensibles aux alcalins qui sont bloqués par la réplication par l’ADN polymérase ou empêchés de devenir un site d’hybridation.

Les ADN simple et double brin contenant du dUTP sont un substrat de l’uracile-ADN glycosylase tandis que l’ARN et l’ADN normal contenant du dUTP ne le sont pas.

L’uracile-ADN glycosylase peut également être utilisé pour augmenter l’efficacité de clonage des produits PCR ayant des amorces contenant du dUTP qui y sont incorporées, ainsi que pour augmenter l’efficacité de la mutagénèse dirigée.

L’uracile-ADN glycosylase dérivé de Gadus morhua possède tous les attributs de l’enzyme dérivée d’E. coli, avec l’avantage supplémentaire d’être thermolabile. Il est complètement et irréversiblement inactivé après 10 minutes d’incubation à 50°C.

Pureté :
L’enzyme est purifiée par chromatographie et soumise à un test de détection des endonucléases contaminantes et des exonucléases.

Tampon de stockage :
Tris-HCl 50 mM (pH 7,5), NaCl 100 mM, EDTA 0,5 mM, DTT 1 mM, Triton X-100 0,1 %, glycérol 50 %.

Conditions de dosage :
Le mélange de réaction contient : Tris-HCl 70 mM, pH 8,0, NaCl 10 mM, EDTA 1 mM, BSA 100 µg/ml, ADN marqué ³H-dUTP et uracile-ADN glycosylase. L’incubation se fait à 37°C pendant 1 heure.

Définition de l’unité :
Une unité correspond à la quantité d’enzyme nécessaire pour libérer 1 nmol d’uracile de l’ADN contenant du dUTP en une heure à 37°C.

Concentration :
1 unité/µl

Applications :
  1.Étude de la réparation de l’ADN et de la détection des mutations.
  2.Augmentation de l’efficacité du clonage des produits PCR.
  3.Augmentation de l’efficacité de la mutagénèse dirigée.
  4.Étude des interactions protéine-ADN.

Source :
Recombinant de Gadus morhua (foie de morue)