Nettoyage des produits PCR à haut débit HT ExoSAP-IT™

HT ExoSAP-IT High-Throughput PCR Product Clean est une formulation alternative de réactif ExoSAP-IT spécialement conçue pour répondre aux exigences uniques des pipettes à haut débit, des plateformes automatisées et des pipettes multicanaux. Le réactif HT ExoSAP-IT a une durée de vie plus longue à des températures plus élevées et une viscosité réduite adaptée au pipetage robotique.

Tout comme la formulation pour PCR ExoSAP-IT Product Cleanup (réf. nº 78200), le réactif HT ExoSAP-IT est un mélange d’exonucléase I et de phosphatase alcaline de crevette (SAP) qui élimine, en une seule incubation, les amorces et les dNTP en excès après une réaction PCR. Le réactif HT ExoSAP-IT offre une plus grande stabilité thermique et une viscosité plus faible, ce qui permet de l’utiliser plus facilement dans des formats automatisés à 96 et 384 puits.

•Nettoyage par PCR à un tube : ajouter le réactif HT ExoSAP-IT directement au produit PCR
•Précision exceptionnelle : atteindre des données de haute qualité, même avec de grandes longueurs de lecture
•Récupération d’échantillons à 10 % : aucune perte de produits PCR, quelle que soit la taille du fragment
•Étape unique et simple : remplace les étapes multiples et le temps perdu inhérent aux microbilles ou aux colonnes
•Traitement à haut débit : un délai d’obtention des résultats encore plus rapide avec une formulation à faible viscosité, qui autorise le pipetage robotique
•Suppression des amorces et les dNTP en excès : n’interfère pas avec les applications en aval
  – séquençage
  – analyse de SNP
  – extension à base unique
  – analyse de fragments
  – transcription in vitro
•Évolutif — Traitement des volumes de réaction de 5 micro;l à 5 L
•Emballage pratique — Disponible en 8 et 12 bandes dans une plaque à 96 puits
•Stable à +25°C pendant 8 heures — Conservation de l’activité fonctionnelle complète et stabilité à 45 °C pendant une semaine

Le réactif HT ExoSAP-IT est ajouté directement au produit PCR et incubé à 37 °C pendant 15 minutes. Après le traitement par PCR, il est inactivé simplement en le chauffant jusqu’à 80°C pendant 15 minutes. Notre formulation à haut débit est conçue pour le pipetage robotique et les pipettes multicanaux. Le réactif HT ExoSAP-IT présente une viscosité inférieure à celle du mélange standard et est disponible sous la forme d’une bandelette à 8 tubes pour faciliter son utilisation.

Le réactif HT ExoSAP-IT utilise deux enzymes hydrolytiques, l’exonucléase I et le SAP, dans un tampon spécialement formulé, pour éliminer les dNTP et amorces indésirables dans les produits PCR. L’exonucléase I contribue à l’élimination des amorces monocaténaires résiduelles et de tout ADN monocaténaire étranger produit durant la PCR. La phosphatase alcaline de crevettes (SAP) supprime les dNTP restant du mélange de la PCR.

Simple : Étape unique
Le réactif HT ExoSAP-IT ne nécessite qu’une seule étape de pipetage et deux incubations. Il vous suffit d’ajouter le réactif HT ExoSAP-IT au produit de PCR afin de pouvoir procéder, dans les 30 minutes qui suivent, au séquençage, à l’analyse de SNP, à l’extension d’une base unique ou à l’analyse de fragments. L’élimination enzymatique des amorces en excès et des nucléotides non incorporés se fait en une seule étape en utilisant le réactif HT ExoSAP-IT dans un seul tube d’une bandelette à 8 ou 12 tubes, dans une plaque PCR à profil bas, à jupe et à 96 puits. Notre nouveau formatage en fait un produit parfaitement adapté aux applications robotiques.

Précision exceptionnelle grâce au réactif HT ExoSAP-IT
Obtention de données de haute qualité, même avec de grandes longueurs de lecture Les lectures de séquences de produits PCR traités avec le réactif HT ExoSAP-IT ont été, en moyenne, plus de 50 bases plus longues que les échantillons traités avec des produits concurrents. À l’aide d’ADN génomique humain, un fragment de 1 007 bp a été séquencé sans appel d’erreur. Les limitations de taille associées aux méthodes alternatives de nettoyage par PCR ne sont plus d’actualité avec le réactif HT ExoSAP-IT. Les valeurs phred 20 de toute la longueur d’une séquence de 970 bp étaient de 822±9 avec des échantillons traités avec le réactif HT ExoSAP-IT puis seulement 776±83 avec des échantillons traités avec Agencourt™ Ampure™ XP.

Aucune perte d’échantillons
L’utilisation du réactif HT ExoSA -IT élimine toutes les purifications de gel ou de colonne, les sédimentations, les filtrations, les microbilles et/ou les séparations magnétiques⁽¹⁾. Le réactif HT ExoSAP-IT permet de récupérer 100 % des produits PCR courts et longs.

Le produit PCR traité avec le réactif HT ExoSAP-IT est stable
Le réactif HT ExoSAP-IT est rigoureusement testé et soumis à un contrôle de qualité strict. Le produit PCR traité par le réactif HT ExoSAP-IT n’a subi aucune dégradation pendant un stockage d’une semaine à 24°C.

Références :
1. DUGAN, K. A., LAWRENCE, H. S., HARES, D. R., FISHER, C. L. ET BUDOWLE B. (2002) J. Forensic Sci 47, 811-818.
2. HANKE, M. ET WINK, M. (1994) BioTechniques 17, 858-860.
3. MU, J., DUAN, J., MAKOVA, K., JOY, D., HUYNH, C., BRANCH, O., LI, W. ET SU, X. (2002) Nature 418, 323-326.
4. SILVA, JR., W. A., COSTA, M. C. R., VALENTE, V., DE FREITAS SOUSA, J., PACÓ-LARSON, M. L., ESPREAFICO, E. M., CAMARGO, S. S., MONTEIRO, E., DE JESUS, A., HOLANDA, M. A., ZAGO, M. A., SIMPSON, A. J. G. ET NETO, E. D. (2001) BioTechniques 30, 537-542.
5. WERLE, E., SCNEIDER C., RENNER, M., VÖLKER, M. AND FIEHN, W. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4354-4355.