Les microbilles magnétiques d’agarose Ni-NTA Thermo Scientific™ Pierce™ offrent une méthode rapide et pratique pour la purification des protéines recombinantes marquées par l’His. Les microbilles sont incubées avec du lysat cellulaire contenant des protéines marquées par l’His, puis séparées magnétiquement du surnageant manuellement ou par l’automatisation à l’aide d’un instrument tel que le processeur de particules magnétiques Thermo Scientific™ KingFisher™ Flex. La protéine liée non spécifiquement peut être éliminée par lavage avant de dissocier la protéine marquée par l’His liée avec un tampon d’élution. Les instruments automatisés sont particulièrement utiles pour la purification à haut débit et le criblage des conditions de purification.

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Les billes d’agarose magnétiques Pierce Ni-NTA sont constituées de billes d’agarose hautement réticulées incrustées de magnétite et d’un chélateur d’acide nitrilotriacétique tétradentate (NTA) lié de manière covalente chargé d’ions nickel divalents. La densité du ligand sur la microbille d’agarose magnétique offre une capacité de liaison similaire ou meilleure que les résines d’agarose traditionnelles avec la caractéristique supplémentaire de la manipulation magnétique. Les microbilles magnétiques d’agarose sont un outil précieux pour la purification à petite échelle (∼ 1 mg) de plusieurs protéines marquées par l’His et pour détecter les conditions d’expression et de purification à utiliser dans des purifications à plus grande échelle avec des supports de chromatographie sur agarose.

Caractéristiques des microbilles d’agarose magnétiques Ni-NTA :
• Haute capacité—volume suffisant pour les procédures de purification de routine et exigeantes ; lie >70 mg de protéines marquées 6xHis par ml de résine déposée
• Microbilles haute performance et reproductibles—les microbilles superparamagnétiques non agrégantes de magnétique (Fe₃O₄) offrent une uniformité exceptionnelle pour les applications de purification HTS manuelles et automatisées
• Faible liaison non spécifique—un protocole de purification optimisé permet une meilleure purification des protéines marquées
• Polyvalent—purifiez les protéines en utilisant des conditions natives ou dénaturantes
• Compatible—s’utilise avec les réactifs de lyse cellulaire Thermo Scientific et une variété d’additifs tampons

La résine d’agarose magnétique superparamagnétique haute performance contenant de la magnétite est validée et optimisée pour une utilisation avec des plateformes magnétiques à haut débit, telles que les processeurs de particules magnétiques KingFisher 96 et KingFisher Flex, mais les microbilles permettent également des performances de premier ordre pour les applications simples de purification de paillasse en utilisant un support magnétique approprié.

Les billes d’agarose magnétiques Ni-NTA sont utilisées pour la purification par affinité à petite échelle ainsi que pour le criblage à haut débit de protéines recombinantes marquées par His. L’étiquette polyhistidine est la plus utilisée des étiquettes par affinité et comporte généralement des résidus de six histidines consécutives (6xHis). Les protéines marquées sont surexprimées dans un certain nombre de systèmes différents, le plus souvent chez les bactéries, et purifiées à partir de lysats cellulaires tels que ceux préparés à l’aide des réactifs d’extraction de protéines bactériennes Thermo Scientific B-PER. La purification des protéines marquées par l’His est réalisée en utilisant un chélateur NTA chargé de nickel qui se coordonne avec les chaînes latérales de l’histidine. Le chélateur NTA contient quatre sites de liaison aux métaux qui permettent une faible lixiviation des ions métalliques et une capacité de liaison élevée. Le protocole pour les microbilles d’agarose magnétiques Ni-NTA a été optimisé pour permettre une grande pureté de la protéine isolée marquée par l’His.