USB™ CycleSeq™ Thermostable DNA Polymerase

L’USB™ CycleSeq™ Thermostable DNA Polymerase est une ADN polymérase thermostable sans exonucléase qui intègre des ddNTP beaucoup plus efficaces que les ADN polymérases thermostables standard. Cela permet de bénéficier de modèles de bandes de séquence plus uniformes et faciles à utiliser, ce qui simplifie l’identification des anomalies de séquence.

L’USB CycleSeq Thermostable DNA Polymerase peut être remplacée par la Thermo Sequenase DNA polymerase dans la mesure où les deux enzymes comprennent des nucléotides modifiés (voir Fig. 1).

Tout comme la Thermo Sequenase DNA Polymerase, la CycleSeq DNA Polymerase inclut la pyrophosphatase inorganique Thermoplasma acidophilum (TAP). La TAP est thermostable et elle convertit la pyrophosphatase en orthophosphate, une caractéristique utile lors des réactions de séquençage cyclique entraînant la production de pyrophosphates.

L’USB CycleSeq Thermostable DNA Polymerase est utile pour le séquençage cyclique (séquençage Sanger) car elle produit des données de séquençage avec des intensités de bande uniformes, ce qui permet de bénéficier de lectures de séquence plus longues et plus précises. Elle est également utile pour les protocoles d’extension d’amorce lors du génotypage SNP.

Source :
Recombinante

Pureté :
Pureté supérieure à 95 % comme déterminé par SDS-PAGE.

Tampon de stockage :
20 mM de Tris-HCl, pH 8,5, 0,1 mM d’EDTA, 1 mM de DTT, 100 mM de KCl, 0,053 unité/μl de pyrophosphatase inorganique Thermoplasma acidophilum, 50 % de glycérol et des stabilisants.

Conditions de test :
Le mélange de réaction contient 25 mM de TAPS, pH 9,3, 50 mM de KCl, 2 mM de MgCl₂, 1 mM de Β-ME, 200 μM de dATP, 200 μM de dGTP, 200 μM de dTTP, 100 μM de dCTP, 0,05 μl de [α33P] dCTP (10 μCi/μl), 400 μg/ml d’ADN activé et CycleSeq Thermostable DNA Polymerase. Après incubation à 74 degrés pendant 10 minutes, la substance insoluble dans l’acide est déterminée (volume de réaction de 50 μl).

Définition de l’unité :
Une unité d’enzyme est définie comme la quantité d’enzymes requise pour catalyser l’incorporation de 10 nmol de dNTP sous forme insoluble dans l’acide pendant 30 minutes à 74°C dans des conditions de test normales.

Concentration :
32 unités/μl