eBioscience™ Mouse Regulatory T Cell Staining Kit #2

L’anticorps FJK-16s réagit avec la Foxp3 de souris / rat également connue sous le nom de FORKHEAD BOX P3, SCURFIN et JM2 ; la réactivité croisée de cet anticorps avec d’autres protéines n’a pas été déterminée. La protéine Foxp3 a 49-55 kDa fait partie de la famille de régulateurs transcriptionnels de type forkhead / winged-helix et a été identifiée comme le gène défectueux chez les souris “scurfy” (sf). L’expression hautement constitutive du Foxp3 de l’ARNm a été indiquée dans les cellules CD4+CD25+ T régulatrices (cellules Treg) et l’expression ectopique de Foxp3 dans les cellules CD4+CD25- donne un phénotype Treg dans ces cellules.

L’immunotransfert avec l’anticorps FJK-16s a cartographié l’épitope en acides aminés 75-125 de la protéine Foxp3 de la souris. Chez l’humain, on a montré que cette région était alternativement épissée au niveau de l’ARNm. Les isoformes alternativement épissées et non épissées sont présentes dans le sous-ensemble CD4 + CD25 + des lymphocytes. Les expériences préliminaires de RT-PCR n’ont pas révélé cette isoforme épissée alternativement dans les splénocytes de souris, suggérant une régulation génétique différente chez la souris et chez l’humain.

La coloration intracellulaire des splénocytes de souris avec le FJK-16s à l’aide de l’ensemble de coloration et du protocole de Foxp3 de souris révèle environ 2 % des splénocytes dans la souche C57Bl / 6 et environ 3 à 5 % dans la souche de souris BALB / c. L’analyse cytométrique en flux multicolore révèle environ 90 % des cellules CD4+CD25+ et 4 % des cellules CD4+CD25- colorées avec FJK-16s. Les cellules B220+, CD11b+, CD11c+ et Ly6G/Gr-1+ ne présentent pas de co-coloration significative avec le FJK-16s. Ces données sont conformes à un rapport récent qui suit l’expression de Foxp3 à l’aide d’un GFP knock-in (Fontenot et al., 2005).

Le FJK-16s présente une réaction croisée avec le Foxp3 de rat. Cela a été démontré par coloration intracellulaire du Foxp3 et la cytométrie en flux des splénocytes de rat en utilisant la même méthode et les mêmes réactifs que ceux utilisés pour les tissus de souris. Veuillez noter que les anticorps CD4 et CD25 inclus dans ce kit ne reconnaissent que les antigènes de souris. Pour la coloration des tissus du rat, veuillez utiliser (CD4 FITC, réf. cat. 11-0040 et CD25 PE, réf. cat. cat. 12-0390)

Le kit de coloration Foxp3 anti-souris a été mis au point et optimisé pour la coloration des splénocytes de souris avec l’anticorps monoclonal FJK-16s.

Non inclus :
contrôles isotypiques pour l’anti-CD4 (IgG2a de rat, réf. cat. 11-4321) et anti-CD25 (IgG1 de rat, n° de réf 12-4301)

Hôte
Rat

Isotype
IgG2a

Réactivité/espèces
Souris

Application possible
Coloration intracellulaire suivie d’une analyse cytométrique en flux