Microbilles magnétiques activées au NHS Pierce™

Les microbilles magnétiques activées au NHS Thermo Scientific Pierce permettent une conjugaison covalente à base d’amine des protéines en microbilles magnétiques dans un format simple de mélange et de déplacement pour une utilisation dans des expériences de purification par affinité personnalisées.

Caractéristiques des microbilles magnétiques activées au NHS :

• Haute capacité — au moins quatre fois supérieure à celle des microbilles magnétiques activées au NHS des autres fournisseurs
• Facile à utiliser — immobilisation en une simple réaction d’une étape avec un temps de manipulation minimal
• Sans danger — aucun produit chimique dangereux n’est nécessaire (p. ex., cyanoborohydrure de sodium, bromure de cyanogène)
• Compatible avec les ligands — utilisation pour immobiliser avec presque tous les composés contenant des amines primaires ou des ligands d’affinité
• Faible liaison non spécifique — la surface des microbilles est prébloquée et tous les groupes d’esters NHS non réactifs sont complètement éteints
• Compatible avec le protocole — le couplage des protéines aux microbilles et les applications en aval peuvent être réalisées manuellement ou sur plateforme automatisée (p. ex., instruments Thermo Scientific KingFisher)

Les microbilles magnétiques activées contiennent des groupes fonctionnels de N-hydroxy-succinimide (NHS) qui réagissent avec des amines primaires pour former des liaisons amides stables. Après la liaison covalente, les protéines immobilisées sont très résistantes au lessivage de la surface de la microbille. Lorsque les microbilles préparées sont utilisées dans des expériences, la liaison non spécifique est négligeable, car les groupes d’ester NHS non réactifs sont complètement bloqués pendant la procédure de couplage. Les microbilles magnétiques activées au NHS Pierce peuvent être couplées et traitées manuellement avec un support magnétique ou des plateformes automatiques telles que les instruments Thermo Scientific KingFisher.

Applications :
• Immobilisation de ligands pour la purification de protéines recombinantes
• Immobilisation d’anticorps pour les immunoprécipitations et les co-immunoprécipitations exemptes de contamination des anticorps dans les éluats
• Immobilisation d’anticorps secondaires pour la purification par affinité de sous-types d’anticorps à partir d’ascite, de sérum et de surnageant de culture cellulaire

Les microbilles magnétiques activées au NHS Pierce offrent un moyen pratique de conjuguer toute protéine souhaitée à une surface de microbilles magnétiques. Le procédé ne nécessite pas de produits chimiques dangereux ni de longs schémas de réaction. Les microbilles sont d’abord incubées avec de la protéine pendant 1 à 2 heures dans un tampon sans amine à un pH 7 à 9 pour permettre le couplage covalent par la chimie d’ester NHS. Les microbilles sont ensuite lavées, puis tous les autres groupes actifs d’esther NHS sont trempés. La chimie réactive aux amines et la trempe successive sont terminées en 3 à 4 heures. La protéine couplée ne s’échappe pas de la surface des microbilles. En outre, les microbilles présentent de très faibles niveaux de liaison non spécifique en raison d’une trempe efficace et d’un agent de blocage exclusif recouvrant la surface de la particule de base. Après conjugaison, les microbilles magnétiques préparées sont généralement utilisées lors des procédures de purification par affinité.