Solution de DNase I (1 unité/μl), exempte de RNase

La DNase I Thermo Scientific élimine l’ADN indésirable présent dans des lysats cellulaires afin d’améliorer l’efficacité d’extraction des protéines.

Caractéristiques de la DNase I sans RNase :

• Dégrade et élimine l’ADN indésirable des échantillons
• Clive l’ADN simple brin et double brin
• Compatible avec les réactifs de lyse cellulaire Thermo Scientific Pierce
• Réduit la viscosité des lysats bactériens (extraits protéiques) pour faciliter le pipetage

La désoxyribonucléase I (DNase I) est un polypeptide glycosylé unique qui dégrade l’ADN simple et double brin indésirable. L’enzyme fonctionne en clivant l’ADN en fragments 5' phosphodinucléotides et en petits fragments oligonucléotidiques. La DNase I est communément ajoutée aux réactifs de lyse cellulaire afin d’éliminer la viscosité due au contenu en ADN des lysats cellulaires bactériens ou d’éliminer les matrices d’ADN des ARN produits par transcription in vitro. La DNase sans RNase est utile pour toute application nécessitant la digestion de l’ADN dans laquelle il est crucial d’éviter d’endommager l’ARN.

Informations générales sur l’utilisation de la DNase I :

• Les ions calcium sont requis pour l’activité de la DNAse I. Des quantités de traces de Ca++ peuvent être présentes à une concentration suffisamment élevée pour que la DNase I soit active ; en revanche, l’utilisation d’EGTA ou de tampons exempts de calcium peut réduire l’activité de la DNase I à des taux indétectables.
• Des taux élevés (100 mM) d’ions monovalents tels que Na+ et K+ diminueront l’activité de la DNase I
• La DNase I est inactivée par chauffage à 65°C pendant 10 minutes
• Unité Kunitz : 1 unité Kunitz est la quantité d’enzyme nécessaire pour provoquer une augmentation de 0,001 à 260 nm/min/ml à 25°C dans 0,1 M de NaOAc, à pH 5,0, en raison de la dégradation d’ADN fortement polymérisé.
• Unités d’analyse de dégradation : 1 unité est définie comme la quantité d’enzyme nécessaire pour dégrader complètement 1 µg d’ADN plasmide en 10 minutes à 37°C dans 10 mM de Tris·HCl à pH 7,5, 50 mM de MgCl₂, 13 mM de CaCl₂.

Spécifications :

• Quantité : 1 000 unités (1 ml)
• Concentration : 1 unité / µl±20 %
• Définition de l’unité : 1 unité dégrade complètement 1 µg d’ADN plasmidique en 10 minutes à 37°C. Une unité de DNase I équivaut à 0,3 unité Kunitz.
• Contamination par la RNase : Aucune activité de ribonucléase détectable en fonction de l’incubation avec la transcription de l’ARN.
• Source : E. coli contenant un gène cloné codant la DNase I bovine
• Poids moléculaire : Env. 29 000
• Composition : DNase I bovine dans 50 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 10 mM de CaCl₂, 50 % de glycérol
• Fournie avec : 1 ml de tampon de réaction 10X, 100 mM de Tris-HCl (pH 7,5), 25 mM de MgCl₂, 1 mM de CaCl₂, 50 mM d’EDTA

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