Pierce™ SDS-PAGE Sample Prep Kit

Le kit de préparation d’échantillons SDS-PAGE Thermo Scientific Pierce élimine rapidement et facilement les niveaux élevés de sels, de dénaturants, de détergents et d’autres composants tampons qui interfèrent avec l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide des protéines.

Caractéristiques du kit de préparation d’échantillons SDS-PAGE :

• Élimine les artefacts de gel causés par des contaminants incompatibles : élimine les colorants, les agents réducteurs, les détergents, les sucres, le glycérol, la guanidine, l’urée et le sulfate d’ammonium afin de fournir des résultats reproductibles par analyse SDS-PAGE
• Compatible avec le dosage de protéine BCA : permet la quantification des protéines de l’échantillon traité avant le chargement du gel
• Enrichit les solutions de protéines diluées : concentre les échantillons de protéines pour l’analyse SDS-PAGE par six en moins de 20 minutes
• Puissant et flexible : traite 2 à 350 µl d’échantillon contenant jusqu’à 70 µg de protéines ; récupération de 75 à 85 % de la protéine totale dans 50 µL de tampon d’élution
• Kit complet et pratique : comprend la résine PAGEprep, le DMSO, les cuvettes de centrifugation et le tampon de chargement d’échantillons

Le kit de préparation d’échantillons SDS-PAGE fournit une méthode simple et efficace pour concentrer les échantillons tout en éliminant les produits chimiques qui interfèrent avec l’analyse SDS-PAGE, tels que les acides et les bases, les détergents, la guanidine et le sulfate d’ammonium. La résine de préparation PAGE exclusive lie la protéine en présence de diméthylsulfoxyde (DMSO). Les contaminants interférents sont ensuite éliminés en lavant la résine liée aux protéines dans un format de cuvette de centrifugation facile à utiliser. Les protéines sont éluées dans un tampon compatible avec le dosage de protéines BCA Pierce, permettant ainsi la quantification d’une partie de l’échantillon traité. Les protéines éluées peuvent ensuite être combinées avec le tampon d’échantillon et analysées sur le système SDS-PAGE de votre choix.

Comprend :
• Suspension en résine PAGEprep, solution DMSO, tampon d’élution, tampon d’échantillon, coupelles de centrifugation et tubes de prélèvement

Applications :
• Corps d’inclusion solubilisés dans de la guanidine·HCI
• Échantillons contenant des tampons à faible pH, des thiocyanates ou de l’urée
• Protéines précipitées dans du sulfate d’ammonium
• Concentration de solutions protéiques diluées

Le kit de préparation d’échantillons SDS-PAGE utilise une résine unique composée de terre diatomée modifiée qui lie les protéines en présence de DMSO. Le protocole est simple et consiste à combiner 2 à 350 µl d’échantillon, contenant jusqu’à 70µ g de protéines, avec 20 µl de résine PAGEprep dans du DMSO (fourni). Les protéines de l’échantillon se lient à la résine en 3 à 5 minutes ; les produits chimiques contaminants non liés sont ensuite éliminés. Puis, les protéines purifiées sont récupérées à partir de la résine dans 50 µl de tampon d’élution. L’échantillon de protéines récupéré est mélangé au tampon de chargement d’échantillons 5X fourni pour le chargement de gel (ou un autre tampon de chargement d’échantillons). La procédure permet de concentrer jusqu’à six fois les échantillons de protéines dilués, ce qui permet de charger plus de protéines par puits. De plus, le dosage protéique BCA Thermo Scientific Pierce (réf. n° 23225) est compatible avec le tampon d’élution et peut être utilisé pour déterminer la concentration protéique finale avant le chargement du gel.

Pour une analyse SDS-PAGE fiable, les échantillons protéiques sont préparés dans un tampon exempt de substances interférentes et à des concentrations protéiques adéquates pour l’analyse. De nombreuses substances interférant avec les tampons d’échantillons types pour l’électrophorèse sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE) sont difficiles à éliminer par les méthodes classiques de préparation des échantillons. Par exemple, des échantillons protéiques contenant la guanidine-HCl 6M précipiteront lorsqu’ils sont mélangés à un tampon Laemmli pour SDS-PAGE, produisant de mauvais résultats sur gel. Heureusement, les échantillons contenant toute une gamme de produits chimiques interférents (agents chaotropiques, détergents, lipides, pH extrêmes et sels) peuvent être rapidement nettoyés avec le kit de préparation d’échantillons SDS-PAGE.

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