Chlorhydrate de blasticidine S (10 mg/ml)

La blasticidine S est un antibiotique nucléoside peptidyl isolé du Streptomyces griseochromogenes. Il s’agit d’un puissant inhibiteur de la synthèse protéique dans les bactéries et les eucaryotes, étant également actif contre les champignons, les nématodes et les cellules tumorales. La blasticidine S agit en bloquant l’hydrolyse de l’ARNt peptidyl induit par des facteurs de libération et inhibe la formation de liaisons peptidiques. Elle est utilisée comme agent de sélection dans les cellules de mammifères et les cellules bactériennes. Les plages de concentration de travail recommandées s’échelonnent entre 1 et 30 µg/ml en fonction de la lignée cellulaire et entre 25 et 100 µg/ml pour la sélection bactérienne. La mort cellulaire survient rapidement et les lignées cellulaires de mammifères stables résistantes à la blasticidine peuvent être générées en moins d’une semaine.

La résistance à la blasticidine S est conférée par BSR et BSD, isolés respectivement à partir de Bacillus cereus K55-S et Aspergillus terreus. Le gène de résistance BSR code la blasticidine S désaminase, qui catalyse la conversion de la blasticidine S en désaminohydroxyblasticidine S. La désaminohydroxyblasticidine S est un dérivé biologiquement inactif de la blasticidine S et n’interagit pas ou n’inhibe pas les ribosomes procaryotes ou eucaryotes. Le gène de résistance BSD code également une blasticidine S désaminase, qui catalyse une réaction similaire à la BSR désaminase. À des fins de sélection bactérienne, la teneur en sel du milieu LB doit rester faible (90 mM) et le pH ne doit pas dépasser 7,0 pour maintenir l’activité de la basticidine S. Une courbe de suppression est recommandée afin de déterminer la concentration minimale efficace de blasticidine S pour tuer les cellules non résistantes.

Applications
Afficher les protocoles détaillés sur la sélection par la blasticidine dans les cellules de mammifères, E. coli et les levures.