Invitrogen™

Kit d’expression protéiques fonctionnelles MembranePro™

Pour les clients qui étudient les GPRC et d’autres protéines membranaires, MembranePro™ est le système prêt à l’emploi qui fournitAfficher plus

Référence	Quantité
A11667	1 kit

Référence A11667

Prix (EUR)

Quantité:

1 kit

Pour les clients qui étudient les GPRC et d’autres protéines membranaires, MembranePro™ est le système prêt à l’emploi qui fournit des protéines membranaires enrichies et fonctionnelles de manière efficace et fiable. Avantages de MembranePro™ :

• Les protéines sont présentes sur des membranes cellulaires humaines (ou d’autres mammifères)
• Le contrôle de la qualité cellulaire et le traitement post-translationnel des mammifères contribuent à la production de produits de protéines fonctionnelles
• Les protéines bourgeonnent sous forme de lipoparticules et sont facilement collectées à partir du milieu de culture
• Les lipoparticules sont enrichies avec des récepteurs exprimés

Le flux de travail de MembranePro™ est moins coûteux en main-d’œuvre par rapport à la production traditionnelle de fractions membranaires. En bref, le protocole MembranePro™ vous permet de :

1. Cloner le gène qui vous intéresse à l’aide d’un vecteur TOPO™
2. Transfecter avec de la Lipofectamine™ 2000 et du réactif MembranePro™ dans des cellules 293FT
3. Récolter des lipoparticules 48 h après transfection, concentrer avec un mélange de précipitation MembranePro™
4. Stocker les lipoparticules à -80 °C ou procéder aux dosages en aval

Les produits MembranePro™ sont proposés en deux configurations – sous forme de kit d’expression (vecteur TOPO™, Lipofectamine™ 2000, mélange de précipitation MembranePro™, réactif MembranePro™, cellules 293FT) et sous forme de kit de support (Lipofectamine™ 2000, mélange de précipitation MembranePro™, réactif MembranePro™). Le kit d’expression n’est disponible qu’en 10 tailles de réaction ; le kit de support est disponible en tailles de réaction 10, 60 et 600.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Lignée cellulaire293FT

Type de livraisonParticules virales (VLP)

Type de protéine expriméeProtéine de membrane

Mécanisme d’expressionExpression cellulaire

À utiliser avec (application)Expression de protéines membranaires

Compatibilité à haut débitCompatible avec le haut débit

Gamme de produitsMembranePro

Quantité1 kit

Agent de sélection (eucaryotique)Blasticidine

Marqueur de sélection eucaryotiqueBsdR

Système d’expressionMammifère

AccélérateurEF-1α

TypeMembranePro Functional Protein Expression Kit

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Le kit contient :
•un kit vecteur TA pEF6 V5-His TOPO™ pour au moins 10 réactions de clonage TOPO™ (stockage à -20 °C)
•3 x10^6 cellules 293FT (stockage dans de l’azote liquide)
•1 x 75 ml de mélange de précipitation MembranePro™ (stockage à température ambiante)
•1 x 0,3 mg (1 mg⁄ml) de réactif MembranePro™ (stockage à -20 °C)
•3 x 0,75 ml de Lipofectamine™ 2000 (à stocker à +4 °C)
•Des manuels

Foire aux questions (FAQ)

I had a problem growing up the 293T cells provided in the MembranePro Functional Protein Expression Kit. Can I use a different cell line?

While other cell lines can be tested, we recommend using the supplied 293FT cells, as the performance of the kit has been optimized for use with this cell line (i.e., transfection efficiency).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

Your MembranePro Functional Protein Expression Kit/Expi293 MembranePro Expression System does not include a positive control. How do I tell if MembranePro particles were formed?

You can visually tell if MembranePro particles formed via a pellet at the bottom of the tube following precipitation. You can also test the function of your MembranePro particles via receptor-ligand binding studies.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

A GPCR has 2 polypeptides - a ligand-binding polypeptide (receptor chain) and the G-protein (signal transduction chain). Can I use a G-protein coupling receptor (RG-form) specific ligand as a tracer?

If a ligand-binding chain is transfected alone, there may not be coupling of G-protein. We have demonstrated agonist ligand binding to 5HT1a and muscarinic M1 receptors captured on MembranePro particles. Different agonists compete ligand off both muscarinic and 5HT1a receptors in MembranePro particles, and they do so in order of affinity, indicating physiologically relevant interaction with the receptors on MembranePro particles. In direct binding studies, agonist binds in the low-affinity form (higher Kd), indicating little or no G-protein is coupled to the receptor. However, the binding is still specific and competitive. You may see increased binding by coexpressing the cognate G-protein.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

What is the size range of proteins produced with the MembranePro Functional Protein Expression Kit and the Expi293 MembranePro Expression System?

The GPCRs we produced and tested are approximately 50 kDa. In theory, there is no limit on the size of the extracellular or transmembrane domains. However, there may be packaging issues if the C-terminal domain is too large.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

Does the expression vector in the MembranePro Functional Protein Expression Kit offer a His tag?

The MembranePro Functional Protein Expression System is optimized for use with the pEF6 vector. However, cloning your gene into the pEF6/V5-His-TOPO vector without a stop codon and in frame with the polylinker will result in a fusion protein with V5 and polyhistidine (6×His) tags on the C-terminus of your protein. As the C-terminus of your transmembrane protein will likely be inside the VLP, these tags will be inaccessible to purification resins and antibodies. In theory, these tags could be used to identify and isolate a fusion membrane protein after denaturing the VLP; however, the MembranePro Functional Protein Expression System does not support using the tags for extraction and purification.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Expression Support Center.

View all Kit d’expression protéiques fonctionnelles MembranePro™ FAQs