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Kit de dosage de cholestérol Amplex™ Red
Citations et références (67)
Invitrogen™

Kit de dosage de cholestérol Amplex™ Red

Le kit de dosage de cholestérol Amplex™ Red constitue une méthode fluorométrique sensible, rapide et simple de détection de trèsAfficher plus
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RéférenceQuantité
A12216500 dosages
Référence A12216
Prix (EUR)
613,65
Online Exclusive
714,00
Économisez 100,35 (14%)
Each
Quantité:
500 dosages
Prix (EUR)
613,65
Online Exclusive
714,00
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Each
Le kit de dosage de cholestérol Amplex™ Red constitue une méthode fluorométrique sensible, rapide et simple de détection de très faibles concentrations de cholestérol à l’aide d’un lecteur de microplaques par fluorescence ou d’un fluorimètre. Le dosage mesure à la fois le cholestérol libre et les esters de cholestéryle.

Consultez notre gamme complète de dosages de microplaques à fluorescence.

•  Détecte à partir de 200 nm (80 ng/ml) de cholestérol
•  aide à mesurer avec précision la teneur en cholestérol de 0,01 µl de sérum humain
•  Détecte à la fois le cholestérol libre et les esters de cholestéryle
•  Permet des mesures de points de temps multiples
•  Conçu pour une interférence d’autofluorescence minimale

Le kit d’essai de cholestérol rouge Amplex contient ces réactifs et tampons :

•  Réactif Amplex Red
•  DMSO
•  Peroxydase de raifort
•  Peroxide d’hydrogène
•  Cholestérol-estérase
•  Cholesterase oxydase
•  Étalon de référence de cholestérol
•  Étalon de référence de fluorescence à la résorufine
•  Tampon pour 5X réactions

Mesure du cholestérol simple et rapide
L’exécution du dosage Amplex™ Red Cholesterol est rapide et facile ; elle ne demande que 30 minutes d’incubation après l’ajout des réactifs sans nécessiter d’étapes de séparation. Le volume de 100 µl de dosage est conçu pour les plaques de 96 puits ; la fluorescence peut être mesurée avec un lecteur de microplaques ou un fluorimètre. Le dosage étant continu, une fois le réactif Amplex™ Red ajouté, de multiples mesures ponctuelles peuvent être prises. Le kit est complet avec tous les réactifs nécessaires sauf l’eau déminéralisée.

Aide à détecter précisément les concentrations de cholestérol très faibles
Le dosage du cholestérol Amplex™ Red utilise des réactions couplées aux enzymes pour produire une résorufine hautement fluorescente pour l’analyse quantitative. La résorufine est produite par réaction du réactif Amplex™ Red avec l’H2O2 produit à partir de l’oxydation assistée par cholestérol-oxydase. Du fait qu’une grande proportion du cholestérol dans le sang existe sous forme d’esters de cholestéryle, la cholestérol-estérase permet de produire du cholestérol libre à partir d’esters de cholestérol. Réaliser le dosage en présence ou en l’absence de cholestérol-estérase permet potentiellement de déterminer les fractions de cholestérol dans chaque forme

Cette méthode hautement sensible permet au kit de dosage Amplex™ Red Cholesterol de détecter des concentrations de cholestérol aussi faibles que 200 nM et de mesurer la teneur en cholestérol de 0,01 µl de sérum humain. Comme les maxima d’absorption et d’émission de la résorufine sont de 571 nm et 585 nm respectivement, l’autofluorescence dans la plupart des échantillons biologiques n’interfère pas avec le dosage.

Utilisation des dosages Amplex Red™ pour une gamme étendue d’enquêtes
Une grande variété de dosages validés Invitrogen Amplex Red™ sont disponibles pour l’étude de la signalisation cellulaire et des lipides, de la neurobiologie, de l’inflammation et de la fonction immunitaire, et du métabolisme. Nous proposons également l’Amplex™ UltraRed (No de catalogue A36006), un réactif de seconde génération offrant plus de sensibilité et une fluorescence plus brillante et le réactif d’arrêt Amplex™ Red/UltraRed ( No de catalogue A33855). Le réactif d’arrêt Amplex™ Red/UltraRed offre commodité et contrôle en permettant à l’utilisateur de mettre fin à la réaction génératrice de signaux de fluorescence à un moment qu’il aura lui-même déterminé. Après ajout du réactif d’arrêt, le signal de fluorescence reste stable pendant au moins 3 heures. Une conception et un emballage de matrice de dosage personnalisés sont également disponibles.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Non destiné à une utilisation thérapeutique ou diagnostique chez l’animal ou l’humain.

Lien connexe
• En savoir plus sur les dosages Amplex™ Red et leur technologie.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Méthode de détectionFluorescence, Fluorescent
Type de colorantAmplex™ Red
FormatPlaque de 96 puits, Plaque 96 puits
Quantité500 dosages
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
CouleurRouge
À utiliser avec (application)Dosage du cholestérol
À utiliser avec (équipement)Lecteur de microplaques, Lecteur de microplaques
Gamme de produitsAmplex
Type de produitKit de dosage du cholestérol rouge
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Stocker au congélateur (entre -5°C et -30°C) à l’abri de la lumière.

Foire aux questions (FAQ)

I'm using an Amplex Red kit, the reagent changes color to pink almost immediately in my own Krebs-Ringer buffer but not in HBSS. Why is this?

The components of Krebs-Ringer buffer (salts) should not cause oxidation of the Amplex reagent (which, in the presence of peroxidase and H2O2 oxidizes to resorufin, which is pink in color and fluorescent). Try water alone (the water used to make the Krebs-Ringer buffer). Since Hank's Buffered Saline Solution is typically purchased rather than made in the lab, it likely would not have the same contaminant. Another option is to degas the buffer prior to use to removed dissolved oxygen radicals.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

For the lipid extraction for use with the Amplex Red Cholesterol Assay Kit (Cat. No. A12216), can the extraction be done in plastic tubes (Falcon tubes, Eppendorf tubes) or is glassware required?

You can use plastic tubes for the extraction of lipids if the plastic material is compatible with the organic solvents used in the extraction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Protein Assays and Analysis Support Center.

In order to determine the cholesterol content of my cells with the Amplex Red Cholesterol Assay Kit (Cat. No. A12216), do I need lysed cells or the extracted lipidome of the cell?

You need to extract the cholesterol from live or lysed cells. The following detergent‐free cholesterol extraction protocol may be of interest to you:

  1. Add 200 µl or less of live cells or lysed cells into 200 µl chloroform‐methanol (v/v 2:1) or 200 µl hexane‐isopropanol (v/v 3:2).
  2. Centrifuge for 5‐10 min at 14,000 rpm in a microcentrifuge.
  3. Transfer the organic phase to a clean tube and vacuum dry.
  4. Redissolve the dried lipids/cholesterol into 1X concentration of Component E, the reaction buffer.
Note: Use a volume of 1X reaction buffer sufficient to resolubilize the lipids/cholesterol. As a general guideline, one may use a volume of 1X reaction buffer equivalent to the original volume of cells or less.
Extraction method originated from the following publications:
  1. Folch, J., Ascoli, I., Lees, M., Meath, J. A. & LeBaron, F. N. (1951) J. Biol. Chem. 191, 833-841
  2. Folch, J., Lees, M. & Sloane-Stanley, G. H. (1957) J. Biol. Chem. 226, 497-509


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Can I use Amplex Red Cholesterol Assay Kit (Cat. No. A12216) with cell or tissue samples?

Yes. The Amplex Red Cholesterol Assay Kit (Cat. No. A12216) can be used with cell or tissue samples. This assay requires samples containing cholesterol, free of any chemical or cellular components that may interfere with the activity of the enzymes in the assay or the performance of the dye. Below is a detergent/surfactant-free lysis/extraction method.

1. Homogenize 1 x 106 cells or ~10 mg tissue into 200 µL chloroform-methanol (v/v 2:1) or 200 µL hexane-isopropanol (v/v 3:2).

Note: These solvents will cause the cells to disrupt immediately upon contact, but the homogenization (vortexing, sonicating, or mechanical homogenizers, etc.) helps to guarantee cell contact with the solvent.

2. Centrifuge for 5-10 min at 14,000 rpm in a microcentrifuge.

3. Transfer the organic phase to a clean tube and vacuum dry.

4. Redissolve the dried lipids/cholesterol into 1X concentration of Component E, the reaction buffer.

Note: Use enough volume of 1X reaction buffer sufficient to resolubilize the lipids/cholesterol. As a general guideline, you may use a volume of 1X reaction buffer equivalent to the original volume of cells or less.

Extraction method originated from:

Folch, J., Ascoli, I., Lees, M., Meath, J. A. & LeBaron, F. N. (1951) J. Biol. Chem. 191, 833-841

Folch, J., Lees, M. & Sloane-Stanley, G. H. (1957) J. Biol. Chem. 226, 497-509

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Can Amplex Red Assays be performed using cell lysates?

This is not recommended. The presence of endogenous proteases can complicate the assay by degrading the horseradish peroxidase (HRP). Endogenous peroxidases and antioxidants can modify the H2O2 required for the reaction, competing with HRP (and catalase) for the substrate.

The Amplex Red Assays are best performed with either purified enzymes or extracted H2O2 in a defined buffer system, extracellular solutions or body fluids (media, serum, etc.) that do not exhibit high levels of endogenous protease or oxidase activity and do not contain antioxidants.

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Citations et références (67)

Citations et références
Abstract
Constitutive hedgehog signaling in chondrosarcoma up-regulates tumor cell proliferation.
Authors:Tiet TD,Hopyan S,Nadesan P,Gokgoz N,Poon R,Lin AC,Yan T,Andrulis IL,Alman BA,Wunder JS
Journal:The American journal of pathology
PubMed ID:16400033
Chondrosarcoma is a malignant cartilage tumor that may arise from benign precursor lesions, such as enchondromas. Some cases of multiple enchondromas are caused by a mutation that results in constitutive activation of Hedgehog-mediated signaling. We found that chondrosarcomas expressed high levels of the Hedgehog target genes PTCH1 and GLI1. Treatment ... More
Overexpression of nicastrin increases Abeta production.
Authors:Murphy MP, Das P, Nyborg AC, Rochette MJ, Dodson MW, Loosbrock NM, Souder TM, McLendon C, Merit SL, Piper SC, Jansen KR, Golde TE
Journal:FASEB J
PubMed ID:12692078
Gamma-secretase cleavage is the final proteolytic step that releases the amyloid beta-peptide (Abeta) from the amyloid beta-protein precursor (APP). Significant evidence indicates that the presenilins (PS) are catalytic components of a high molecular weight gamma-secretase complex. The glycoprotein nicastrin was recently identified as a functional unit of this complex based ... More
Association of excitatory amino acid transporters, especially EAAT2, with cholesterol-rich lipid raft microdomains: importance for excitatory amino acid transporter localization and function.
Authors:Butchbach ME, Tian G, Guo H, Lin CL
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:15187084
In the present study, we investigated the role of membrane cholesterol in the function of glutamate transporters. Depletion of membrane cholesterol by methyl-beta-cyclodextrin resulted in reduced Na(+)-dependent glutamate uptake in primary cortical cultures. Glial glutamate transporter EAAT2-mediated uptake was more sensitive to this effect. Cell surface biotinylation and immunostaining experiments ... More
Lipid rafts in the maintenance of synapses, dendritic spines, and surface AMPA receptor stability.
Authors:Hering H, Lin CC, Sheng M
Journal:J Neurosci
PubMed ID:12716933
'Cholesterol/sphingolipid microdomains (lipid rafts) in the membrane are involved in protein trafficking, formation of signaling complexes, and regulation of actin cytoskeleton. Here, we show that lipid rafts exist abundantly in dendrites of cultured hippocampal neurons, in which they are associated with several postsynaptic proteins including surface AMPA receptors. Depletion of ... More
Involvement of raft-like plasma membrane domains of Entamoeba histolytica in pinocytosis and adhesion.
Authors:Laughlin RC, McGugan GC, Powell RR, Welter BH, Temesvari LA
Journal:Infect Immun
PubMed ID:15322032
'Lipid rafts are highly ordered, cholesterol-rich, and detergent-resistant microdomains found in the plasma membrane of many eukaryotic cells. These domains play important roles in endocytosis, secretion, and adhesion in a variety of cell types. The parasitic protozoan Entamoeba histolytica, the causative agent of amoebic dysentery, was determined to have raft-like ... More
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