Amplex™ Red Phospholipase D Assay Kit
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Amplex™ Red Phospholipase D Assay Kit

Le kit d’analyse Amplex™ Red Phospholipase D fournit une méthode sensible et simple pour détecter l’activité de la phospholipase DAfficher plus
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RéférenceQuantité
A12219500 dosages
Référence A12219
Prix (EUR)
730,00
Each
Quantité:
500 dosages
Prix (EUR)
730,00
Each
Le kit d’analyse Amplex™ Red Phospholipase D fournit une méthode sensible et simple pour détecter l’activité de la phospholipase D (PLD) à l’aide d’un lecteur de microplaques à fluorescence ou d’un fluoromètre.

Consultez notre gamme complète de dosages de microplaques à fluorescence.

• Détecte les niveaux d’activité de la phospholipase-C à partir de 10 U/ml
• Le format permet des mesures à différents points dans le temps
• Conçu pour une interférence d’autofluorescence minimale

Dans ce dosage couplé aux enzymes, l’activité du PLD est surveillée indirectement à l’aide de 10-acétyl-3,7-dihydroxyphénoxazine (réactif Amplex™ Red), une sonde fluorogénique sensible pour le peroxyde d’hydrogène. La PLD convertit la phosphatidylcholine (lécithine) en choline, qui est ensuite oxydée par la choline oxydase en bétaïne et en peroxyde d’hydrogène. En présence de peroxydase de raifort, le peroxyde d’hydrogène réagit avec le réactif Amplex™ Red dans un rapport stœchiométrique 1:1 pour générer la résorufine du produit hautement fluorescent.

Étant donné que la résorufine possède des maxima d’absorption et d’émission de fluorescence d’environ 571 nm et 585 nm, respectivement, il y a peu d’interférences dues à l’autofluorescence dans la plupart des échantillons biologiques.

Utilisation des dosages Amplex™ Red pour une gamme étendue d’enquêtes
Une grande variété de dosages Amplex™ Red validés sont disponibles pour l’étude de la signalisation cellulaire et des lipides, de la neurobiologie, de l’inflammation et de la fonction immunitaire, et du métabolisme. Nous proposons également un réactif Amplex™ UltraRed (No de catalogue A36006), un réactif de deuxième génération caractérisé par une plus grande sensibilité et une fluorescence plus brillante, ainsi que le réactif d’arrêt Amplex™ Red/UltraRed Stop ( No de catalogue A33855). Parce qu’il permet de terminer la réaction générant le signal de fluorescence à un moment défini par l’utilisateur, le réactif Amplex™ Red/UltraRed Stop est synonyme de practicité et de contrôle. Une fois le réactif d’arrêt ajouté, le signal de fluorescence reste stable pendant au moins trois heures. Une conception et un emballage de matrice de dosage personnalisés sont également disponibles.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Méthode de détectionIntensité de fluorescence
Quantité500 dosages
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
Propriétés du substratSubstrat à base de lipides, substrat chimique
Type de substratSubstrat de phospholipase
Enzyme ciblePhospholipase
À utiliser avec (application)Dosage de la phospholipase
À utiliser avec (équipement)Lecteur de microplaques à fluorescence
Gamme de produitsAmplex
Type de produitDosage de la phospholipase
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Stocker au congélateur (entre -5°C et -30°C) à l’abri de la lumière.

Foire aux questions (FAQ)

I'm using an Amplex Red kit, the reagent changes color to pink almost immediately in my own Krebs-Ringer buffer but not in HBSS. Why is this?

The components of Krebs-Ringer buffer (salts) should not cause oxidation of the Amplex reagent (which, in the presence of peroxidase and H2O2 oxidizes to resorufin, which is pink in color and fluorescent). Try water alone (the water used to make the Krebs-Ringer buffer). Since Hank's Buffered Saline Solution is typically purchased rather than made in the lab, it likely would not have the same contaminant. Another option is to degas the buffer prior to use to removed dissolved oxygen radicals.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Can Amplex Red Assays be performed using cell lysates?

This is not recommended. The presence of endogenous proteases can complicate the assay by degrading the horseradish peroxidase (HRP). Endogenous peroxidases and antioxidants can modify the H2O2 required for the reaction, competing with HRP (and catalase) for the substrate.

The Amplex Red Assays are best performed with either purified enzymes or extracted H2O2 in a defined buffer system, extracellular solutions or body fluids (media, serum, etc.) that do not exhibit high levels of endogenous protease or oxidase activity and do not contain antioxidants.

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Citations et références (17)

Citations et références
Abstract
Phospholipase D1 production of phosphatidic acid at the plasma membrane promotes exocytosis of large dense-core granules at a late stage.
Authors:Zeniou-Meyer M, Zabari N, Ashery U, Chasserot-Golaz S, Haeberlé AM, Demais V, Bailly Y, Gottfried I, Nakanishi H, Neiman AM, Du G, Frohman MA, Bader MF, Vitale N
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:17540765
'Substantial efforts have recently been made to demonstrate the importance of lipids and lipid-modifying enzymes in various membrane trafficking processes, including calcium-regulated exocytosis of hormones and neurotransmitters. Among bioactive lipids, phosphatidic acid (PA) is an attractive candidate to promote membrane fusion through its ability to change membrane topology. To date, ... More
Cholesterol distribution in the Golgi complex of DITNC1 astrocytes is differentially altered by fresh and aged amyloid beta-peptide-(1-42).
Authors:Igbavboa U, Pidcock JM, Johnson LN, Malo TM, Studniski AE, Yu S, Sun GY, Wood WG
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:12584199
'The Golgi complex plays an important role in cholesterol trafficking in cells, and amyloid beta-peptides (Abetas) alter cholesterol trafficking. The hypothesis was tested that fresh and aged Abeta-(1-42) would differentially modify Golgi cholesterol content in DINTC1 astrocytes and that the effects of Abeta-(1-42) would be associated with the region of ... More
The antisignaling agent SC-alpha alpha delta 9, 4-(benzyl-(2-[(2,5-diphenyloxazole-4-carbonyl)amino]ethyl)carbamoyl)- 2-decanoylaminobutyric acid, is a structurally unique phospholipid analogue with phospholipase C inhibitory activity.
Authors:Vogt A, Pestell KE, Day BW, Lazo JS, Wipf P,
Journal:Mol Cancer Ther
PubMed ID:12481409
'Phospholipids and lipid second messengers mediate mitogenic signal transduction and oncogenesis, but there have been few successful examples of small molecules that affect biologically important phospholipid metabolism. Here we investigated the actions of a previously described antitumor agent, 4-(benzyl-(2-[(2,5-diphenyloxazole-4-carbonyl)amino]ethyl)carbamoyl)- 2-decanoylaminobutyric acid (SC-alpha alpha delta 9), which has antisignaling properties, on ... More
Interfacial sensing by alveolar type II cells: a new concept in lung physiology?
Authors:Ravasio A, Hobi N, Bertocchi C, Jesacher A, Dietl P, Haller T,
Journal:Am J Physiol Cell Physiol
PubMed ID:21270294
'Alveolar type II (AT II) cells are in close contact with an air-liquid interface (I(AL)). This contact may be of considerable physiological relevance; however, no data exist to provide a satisfying description of this specific microenvironment. This is mainly due to the experimental difficulty to manipulate and analyze cell-air contacts ... More
Loss of the ceramide transfer protein augments EGF receptor signaling in breast cancer.
Authors:Heering J, Weis N, Holeiter M, Neugart F, Staebler A, Fehm TN, Bischoff A, Schiller J, Duss S, Schmid S, Korte T, Herrmann A, Olayioye MA,
Journal:Cancer Res
PubMed ID:22472120
'Triple-negative breast cancers (TNBC) are especially refractory to treatment due to their negative hormone receptor and ErbB2/HER2 status. Therefore, the identification of cancer-associated deregulated signaling pathways is necessary to develop improved targeted therapies. Here, we show that expression of the ceramide transfer protein CERT is reduced in TNBCs. CERT transfers ... More