GeneArt™ Site-Directed Mutagenesis System

Le système de mutagenèse dirigée GeneArt™ fournit un moyen de pointe, simple, pratique et hautement efficace pour générer des mutations sur une construction cible in vitro en moins de trois heures. Ce système remplace le système populaire de mutagenèse dirigée GeneTailor™, et a été complètement repensé pour être à la pointe des produits de mutagenèse dirigée commercialisés actuellement. Ce produit fait monter d’un cran notre technologie de mutagenèse. Remarque : Le système ne comprend pas d’enzyme de PCR ; celle-ci doit être achetée séparément. L’enzyme recommandée pour ce kit est l’ADN polymérase AccuPrime™ Pfx.

• Puissant : permet les substitutions, suppressions ou insertions d’un maximum de 12 nucléotides dans des plasmides d’un maximum de 14 Kb
• Efficace : vous permet d’obtenir le mutant souhaité du premier coup ; plus de 90 % de mutants corrects pour un plasmide de 3 Kb
• Rapide : vous permet d’obtenir votre ADN plasmidique muté en moins de 3 heures grâce au protocole de manipulation simple et minimal
• Polyvalent : utilisez des plasmides de nombreuses tailles, et de l’ADN isolé de n’importe quelle source, sans avoir besoin de vecteurs, de souches hôtes ou de sites de restriction spécialisés

Création simple des mutants souhaités
La création de mutants avec le système de mutagenèse dirigée GeneArt™ s’appuie sur les propriétés inhérentes de l’ADN méthylase, de l’ADN polymérase haute fidélité, des enzymes de recombinaison et de l’endonucléase native McrBC d’E. coli. Incorporez simplement la ou les mutation(s) (12 nucléotides maximum) souhaitées dans les amorces, puis après PCR, recombinaison et transformation, vous obtenez des vecteurs comportant uniquement les mutations souhaitées avec un taux d’efficacité pouvant atteindre 90 %. Le vecteur modèle auquel vous ajoutez des mutations peut être isolé de toute source et avoir une dimension pouvant aller jusqu’à 14 Kb. Pour créer des constructions complètes ou pour joindre de grands morceaux d’ADN non lié, consultez notre kit de clonage et d’assemblage transparent GeneArt™ (réf. A13288) ou notre système de montage génétique de haut niveau GeneArt™ (réf. A13286).

Protocole de mutagenèse optimisé
Le système de mutagenèse dirigée GeneArt™ a été optimisé pour une efficacité et une simplicité optimales. Les étapes de méthylation et d’amplification d’ADN sont combinées en une seule réaction sans avoir à passer par l’étape de digestion in vitro DpnI. Après méthylation et amplification, une réaction de recombinaison in vitro de 10 minutes des produits de PCR amplifiés augmente la sortie de colonie de 3 à 10 fois ; résultat : une mutagenèse beaucoup plus efficace. Une transformation finale de l’ADN muté en cellules E.coli DH5α™ digère tout ADN parental méthylé, ne laissant plus que le produit de la réaction de mutagenèse non méthylé et intact. Aucun processus de purification ou de digestion supplémentaire n’est nécessaire. Des colonies peuvent être sélectionnées de façon ponctuelle le lendemain dans le but de contrôler les mutations.