GeneArt™ Seamless Cloning and Assembly Kit

Le kit de clonage et d’assemblage transparents GeneArt™ permet le clonage simultané et directionnel de 1 à 4 fragments de PCR, composés de n’importe quelle séquence, dans n’importe quel vecteur linéarisé, en une seule réaction à température ambiante de 30 minutes. Le kit contient tout le nécessaire pour l’assemblage des fragments d’ADN, ainsi que leur transformation en E. coli, pour la sélection et la croissance de vecteurs recombinants.

• Rapidité et simplicité : effectuez le clonage de 4 fragments d’ADN maximum, avec la séquence de votre choix et de manière simultanée dans un seul vecteur (jusqu’à 13 Kb) ; aucune digestion par des enzymes de restriction, ligature ou sites de recombinaison nécessaires
• Précision et efficacité : conçu pour vous laisser cloner ce que vous voulez, où vous le voulez, dans l’orientation que vous souhaitez tout en obtenant jusqu’à 90 % de clones corrects et ne délaissant aucune séquence supplémentaire
• Flexibilité du vecteur : Utilisez notre vecteur linéaire ou un vecteur de votre choix
• Outils gratuits — concevez des oligos d’ADN et plus encore grâce à notre interface Web gratuite qui vous guide étape par étape tout au long de votre projet
• Applications diverses — rationalisez de nombreuses techniques de biologie synthétique et de biologie moléculaire grâce à la combinaison, l’ajout, la suppression ou l’échange rapide de segments d’ADN

Pour le clonage de plus de 4 fragments d’ADN, des molécules finales supérieures à 110 Kb ou pour l’utilisation d’éléments d’ADN préexistants trop longs pour être amplifiés par PCR, envisagez le système d’assemblage génétique de haut niveau GeneArt™ (réf. A13285).

Création de clones simples et rapides
Le clonage transparent GeneArt™ est un processus simple en deux étapes, composé d’une réaction d’assemblage en tube suivie d’une transformation en E. coli chimiquement compétent TOP10 One Shot™. Ce kit utilise les propriétés d’un mélange enzymatique exclusif pour assembler des fragments d’ADN avec une homologie partagée des extrémités terminales sans séquences supplémentaires ni cicatrices (transparent). Une portion de la réaction d’assemblage est ensuite transformée en cellules TOP10 compétentes fournies, permettant d’obtenir des clones prêts à être analysés le jour suivant. L’homologie d’extrémités terminales 15 paires de base requise peut être facilement conçue par amplification PCR avec des oligos d’ADN personnalisés.

Efficacité, flexibilité et précision du clonage
Avec le kit de clonage et d’assemblage transparent GeneArt™, les principaux facteurs qui influent sur l’efficacité du clonage sont la taille des éléments d’ADN (100 bp à 5 Kb), la taille totale de la molécule finale (≤ 13 Kb) et la qualité et la spécificité du fragment. L’extrémité terminale des fragments PCR (saillies A ou extrémité tronquée) n’affecte pas l’efficacité du clonage.

Les efficacités de clonage classiques pour différents nombres de fragments clonés en pUC19L sont les suivantes :
• 90 % pour un élément d’ADN simple de 5 Kb
• 70 % pour 4 fragments de 1 Kb chacun
• 40 % pour 4 fragments d’ADN de 2 Kb chacun

Le succès du clonage ne dépend pas de la séquence d’inserts et du type de vecteur, vous permettant ainsi de concevoir et d’ajouter presque n’importe quelle séquence, ou combinaison de séquences, souhaitée à n’importe quel plasmide tant qu’elle peut être linéarisée par une digestion par enzymes de restriction ou par PCR. Les clones circularisés obtenus à partir de la réaction ne contiennent que la séquence de votre vecteur, inserts et homologies désignées d’origine, sans insertions de nucléotides étrangères.

Support de conception de clonage in silico
Une étape clé du clonage transparent GeneArt™ est la conception correcte des fragments et des oligos avec une homologie et un espacement adaptés, ce qui contribue à assurer l’assemblage réussi de vos clones. Pour simplifier et accélérer le processus de conception, nous proposons un outil en ligne gratuit pour vous aider à concevoir vos expériences in silico. L’outil vérifie la compatibilité de la conception expérimentale avec les spécifications du produit, conçoit des oligos d’ADN avec homologie des extrémités terminales pour l’amplification PCR des différents éléments à cloner et présente à l’utilisateur une représentation graphique du vecteur ainsi qu’une séquence annotée téléchargeable au format GenBank compatible avec le logiciel Vector NTI™.

Applications
Le Kit d’assemblage et de clonage transparent GeneArt™ est conçu pour dynamiser les expériences de clonage et d’assemblage d’ADN dans un large éventail d’applications de biologie moléculaire et de biologie synthétique, entre autres. Ce produit permet de créer des vecteurs d’expression modulaires, avec des éléments interchangeables, et peut être utilisé pour effectuer une variété d’opérations qui nécessiteraient sinon une multitude d’étapes. Utilisez le kit pour : construire des protéines hybrides, supprimer, remplacer ou ajouter des éléments d’ADN tels que des sites de restriction dans un vecteur existant ; et exécuter de nombreuses autres techniques nécessitant une manipulation de séquences génétiques, le tout en toute simplicité.