CSM Media for Mav203 Yeast Cells

Le milieu CSM pour cellules de levure Mav203 est un milieu spécialement conçu pour fabriquer des plaques de gélose quiAfficher plus

Référence	Quantité
A13292	2 l

Référence A13292

Prix (EUR)

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Le milieu CSM pour cellules de levure Mav203 est un milieu spécialement conçu pour fabriquer des plaques de gélose qui permettent la croissance des cellules Saccharomyces cerevisae MaV203. Ce produit est fourni avec suffisamment de réactifs pour préparer 2 litres de milieux solides avec les composants suivants par litre :

• CSM (sans tryptophane) : 0,74 g
• Base azotée de levure : 6,66 g
• Sulfate d’ammonium : 5 g
• Glucose : 20 g
• Gélose : 20 g

Compatible avec toutes les applications MaV203
Le milieu CSM est optimisé pour le système d’assemblage génétique de haut niveau GeneArt™, y compris la récupération pour les transformations de vecteurs une fois qu’ils ont été adaptés à la levure à l’aide de la cassette de conversion de vecteur de haut niveau GeneArt™. Le milieu peut également être utilisé pour cultiver des cellules de levure compétentes MaV203, à l’échelle de la bibliothèque et du sous-clonage (réf. 11281-011 et 11445-012).

Protocole de préparation des plaques
Pour chaque litre, utilisez un sachet de milieu de levure de gélose CSM -Trp sans glucose et 1 flacon de 20 % de glucose. Dissoudre le contenu du sachet dans 900 ml d’eau distillée et autoclaver pendant 20 minutes au cycle du liquide. Laisser refroidir la solution à 55°C, puis ajouter un flacon de 20 % de glucose (100 ml). Bien mélanger et verser les plaques.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Type de produit finalPlaques de gélose

À utiliser avec (application)Optimisé pour une utilisation avec le système d’assemblage génétique de haut niveau GENEART™, A13285

Type de milieuMilieu CSM

Méthode de préparationAutoclave

Gamme de produitsGeneArt

Quantité2 l

Conditions d’expéditionTempérature ambiante

Désignation des souchesMaV203

FormeLiquide, poudre

Type de produitMilieu CSM

StérilitéNon stérile

Classe d’organisme cibleS. cerevisiae

Unit SizeEach

Contenu et stockage

Les milieux CSM pour cellules de levure MaV203 contiennent suffisamment de réactifs pour préparer 2 litres de milieu gélosé. Le produit contient deux sachets de poudre prémélangée et deux flacons de 100 ml de glucose à 20 % stérilisé par filtration.

Conservez tous les composants à température ambiante.

La stabilité de tous les composants est garantie pendant 6 mois lorsqu’ils sont correctement conservés.

Foire aux questions (FAQ)

Can I purchase the CSM Media from the GeneArt High-Order Genetic Assembly System separately?

The CSM Media is available as a standalone item (Cat. No. A13292).

With the GeneArt High-Order Genetic Assembly System, I'm getting no positive colonies detected by yeast colony PCR. Can you please offer some troubleshooting tips?

We would recommend trying to re-streak the colony on a fresh plate and repeat colony PCR. Do not break open the yeast cells with the beads supplied with the kit; the beads are for transformation into E. coli. Additionally, use less than 0.5 µL of diluted yeast lysate in a 50 µL PCR reaction.

With the GeneArt High-Order Genetic Assembly System, I see small or no yeast colonies after transformation. Can you please offer some suggestions?

Ensure that yeast transformations are incubated at 30 degrees C for 3 days for proper colony formation.

With the GeneArt High-Order Genetic Assembly System, I did not get any yeast colonies after transformation and the transformation control did not work. Can you please offer some suggestions?

Please review the following suggestions:
– Perform transformation exactly as described in protocol.
– Do not freeze-thaw or vortex MaV203 yeast competent cells.
– Use CSM-Trp agar plates for the transformation.
– For best results, use fresh DMSO from an unopened bottle. You may use DMSO stored at -20 degrees C.

I want to use my own E. coli vector for my assembly. Can I do this? How?

Yes, you should be able to adapt your E. coli vector into a yeast-compatible cloning vector using the GeneArt High-Order Vector Conversion Cassette (Cat. No. A13291) for use with the GeneArt High-Order Genetic Assembly System with the following provisions:
– Start by using the DNA Oligo Designer web tool, and verify that your vector and the GeneArt High-Order Vector Conversion Cassette do not share internal homology to prevent potential re-arrangements when using your adapted vector with the GeneArt High-Order Genetic Assembly System.
– Use a vector with a single- or low-copy-number origin for a final construct of >15 kb, if the final plasmid construct will be transferred into E. coli. Usually, low-copy-number E. coli vectors have significantly higher capacity than high-copy number vectors.
– Avoid chloramphenicol selection markers on the custom vector since this is the marker on the cassette.
– After ligation (1:10 vector: insert ratio recommended), transform competent E. coli cells with the ligation mixture and plate on double selection LB plates (chloramphenicol plus the antibiotic marker on your custom vector backbone).To linearize your yeast-adapted cloning vector for multi-fragment assembly, a double-digestion is required to avoid background caused by residual palindromic end sequences resulting from a single enzyme digestion.

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