Le kit d’assemblage de type IIs GeneArt®, Aar I permet le clonage homogène et l’assemblage de jusqu’à 8 fragments d’ADN par clivage et ligature simultanés dans une seule réaction. Le kit utilise une technologie similaire au clonage Golden Gate avec l’enzyme de restriction Aar I de type IIs et peut être utilisé pour assembler plusieurs fragments dans un ordre prédéterminé dans n’importe quel vecteur compatible. Étant donné que l’assemblage de type IIs n’est pas basé sur une recombinaison homologue, le risque de réarrangements est minime et votre construction finale nécessite la confirmation d’une séquence minimale.

Le kit est proposé en trois versions, chacune avec une enzyme de restriction de type IIs différente (Aar I, Bsa I ou Bbs I). Toutes les versions incluent le mélange enzymatique tout-en-un, le vecteur de clonage et les contrôles de clonage. Notre outil de conception pour construction et amorce GeneArt® doit être utilisé pour déterminer le kit d’assemblage GeneArt® adapté pour vos fragments ; il fournit une interface facile à utiliser pour concevoir votre construction et créer et commander des amorces, si nécessaire.

• Assemblez plusieurs fragments d’ADN dans n’importe quel ordre, dans n’importe quel vecteur compatible, sans cicatrices.
• Évitez une recombinaison homologue et les réarrangements associés lors du clonage homologue ou des séquences répétitives.
• Utilisez-le pour l’assemblage de TAL, de variantes de gènes et de séquences répétitives.
• Créez vos propres vecteurs de clonage et d’expression avec un élément vectoriel personnalisé.
• Minimisez la confirmation de séquence de la construction finale.
• Choisissez parmi trois enzymes de type IIs.

Clonage de type IIs
Le clonage de type IIs GeneArt® est un processus simple en deux étapes, composé d’une réaction d’assemblage in vitro suivie d’une transformation en E. coli compétent. L’endonucléase Aar I de restriction de type IIS reconnaît une séquence d’ADN asymétrique et clive la molécule d’ADN à une distance définie du site de reconnaissance Aar I. Les extrémités de votre fragment d’ADN peuvent être conçues pour être flanquées par le site de restriction Aar I, de sorte que la digestion des fragments élimine le site de reconnaissance et génère des extrémités débordantes complémentaires qui peuvent être ligaturées de façon transparente, créant ainsi une jonction qui ne dispose pas du site d’origine. Le kit comprend un vecteur de destination, appelé pType IIs, qui est optimisé pour cette approche.

Efficacité, flexibilité et précision du clonage
Avec le kit d’assemblage GeneArt® de type IIs, les principaux facteurs qui influent sur l’efficacité du clonage sont la taille des éléments d’ADN, la taille totale de la molécule finale (? 10 kb), ainsi que la qualité et la spécificité du fragment.

Les efficacités de clonage classiques pour différents nombres de fragments clonés en pType IIs sont :

• > 95 % pour 5 fragments de 1 kb chacun
• > 60 % pour 8 fragments de 1 kb chacun
• > 85 % pour 2 fragments identiques de 1 kb chacun

Assistance de conception de clonage in silico
une étape clé du clonage GeneArt® type IIs est la conception correcte des fragments et des oligos avec une homologie et un espacement adaptés, ce qui contribue à assurer l’assemblage réussi de vos clones. Pour simplifier et accélérer le processus de conception, nous proposons l’outil de conception de construction et d’amorce GeneArt® pour vous aider à concevoir vos expériences in silico. L’outil recommande le kit GeneArt® adapté pour votre assemblage, vérifie la compatibilité de la conception expérimentale avec les spécifications du produit, conçoit des oligos d’ADN, si nécessaire, et présente à l’utilisateur une représentation graphique du vecteur, ainsi qu’une séquence annotée téléchargeable au format GenBank et compatible avec le logiciel VectorNTI®.

Autres produits recommandés :

• Kit de clonage PCR Zero Blunt® TOPO®, sans cellules compétentes(n° de cat. 450245)
• Kit de clonage PCR Zero Blunt® TOPO®, avec cellules E. coli chimiquement compétentes One Shot® TOP10 (n° de cat. K280020)
• Cellules résistantes au phage One Shot® MAX Efficiency™ DH10B™ T1 (n° cat. 12331-013)