Citations et références (2)

Invitrogen™

Epi5™ Episomal iPSC Reprogramming Kit

Le kit de reprogrammation de CSPi épisomiques Epi5™ offre un ensemble facile à utiliser et très efficace de 5 vecteursAfficher plus

Référence	Quantité
A15960	1 kit

Référence A15960

Prix (EUR)

1 442,00

Quantité:

1 kit

Prix (EUR)

1 442,00

Le kit de reprogrammation de CSPi épisomiques Epi5™ offre un ensemble facile à utiliser et très efficace de 5 vecteurs épisomiques conçus par le Dr Okita au laboratoire du professeur Yamanaka au Centre de recherche et d’application cellulaires SPi (CiRa) de l’Université de Kyoto. Ce système produit des cellules souches pluripotentes induites (CSPi) humaines exemptes de transgènes et de virus dont l’efficacité varie de 0,04 % à 0,3 %, selon le type de cellule à reprogrammer.

Les caractéristiques du kit de reprogrammation de CSPi épisomique Epi5™ sont les suivantes :

• Facile à utiliser et très efficace : aucun besoin de petites molécules lors de la reprogrammation et la suppression de p53 ajoutée offrent une meilleure génération de CSPi (1).
• Utilisable pour toutes les étapes de votre recherche de CSPi : la reprogrammation exempte de transgènes et de virus permet une utilisation de la recherche fondamentale à la recherche préclinique.
• Flexibilité dans les systèmes de milieu : peut être utilisé dans des systèmes de milieux avec ou sans apport nourricier.

Création de CSPi exemptes de transgènes et de virus
Les vecteurs épisomiques sont un système bien décrit pour produire des CSPi exemptes de virus et de transgènes, fournissant une source de CSPi pour toutes les étapes de votre recherche sur les cellules souches pluripotentes. D’autres méthodes de reprogrammation, telles que les lentivirus, contiennent des transgènes qui peuvent s’intégrer dans le génome de l’hôte, perturbant potentiellement le génome ou entraînant des résultats imprévisibles.

En tant que vecteurs oriP/EBNA1, ces vecteurs épisomiques contiennent 5 facteurs de reprogrammation (Oct4, Sox2, Lin28, Klf4 et L-Myc) et ne répliquent les valeurs extra-chromosomiques qu’une seule fois par cycle cellulaire. À ce taux de réplication, les épisomes sont perdus à un taux d’environ 5 % par génération cellulaire. Ce système montre une génération de CSPi améliorée grâce à la suppression de p53. L’inclusion de L-Myc s’est montrée plus puissante et plus spécifique que celle de c-Myc pendant la génération de CSPi humaine (1).

Système facile à utiliser
Ce kit de 2 flacons fournit le système optimal pour la reprogrammation de vecteurs épisomiques et élimine le besoin d’utiliser de petites molécules dans le milieu de reprogrammation. Les vecteurs épisomiques sont introduits dans la cellule par électroporation. Nous recommandons l’utilisation du système de transfection Neon™ pour l’électroporation, qui permet une flexibilité du volume et donc du nombre de cellules nécessaires à la reprogrammation.

Flexibilité dans la sélection des systèmes de milieu
Le kit de reprogrammation de CSPi épisomiques Epi5™ peut être utilisé avec plusieurs types de cellules et systèmes de milieux. Les protocoles pour les fibroblastes et les cellules sanguines CD34+ sont disponibles dans la reprogrammation avec ou sans apport nourricier.

1. Okita K, Matsumara Y, Sato Y, et al. A more efficient method to generate integration free human iPS cells. Nature Methods 8, 409-412, 2011.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Méthode de clonageNéant

Type de livraisonTransfection

À utiliser avec (application)Engineering et reprogrammation des cellules souches

À utiliser avec (équipement)Électroporateur, système de transfection Neon

Principales fonctionsel

Gamme de produitsEpi5

Type de produitKit de reprogrammation de CSPi épisomiques

AccélérateurCAG

Marqueur de protéineNéant

Quantité1 kit

Origine de la réplicationOrigine pUC

Gène rapporteurAucun

Agent de sélection (eucaryotique)Aucun

VecteurOriP EBNA

Unit SizeEach

Contenu et stockage

2 tubes. Stocker entre -5 et -20°C.

Foire aux questions (FAQ)

Can I use pen/strep or other antibiotics for episomal reprogramming of cells?

The use of antibiotics is not recommended during episomal reprogramming, especially Fungizone antimycotic. If antibiotics must be used during the reprogramming process, pen/strep could be used. For established iPSCs (after reprogramming is complete), either antibiotic/antimycotic or pen/strep should be fine.

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Can I reprogram mouse cells with the Epi5 Episomal iPSC Reprograming Kit (Cat. No. A15960)?

No. The Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960) was designed to reprogram human cells, not mouse cells. We currently only have data with this kit on reprogramming human cells, which aligns with the use of EBNA/oriP episomal vectors mainly in primate cells. Although rodent cells lack the oriP replicon and are not permissive, some studies replaced or modified oriP with other sequences to mediate replication and some literature reported the use of unmodified EBNA/oriP in certain hamster and mouse lines.

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When generating iPSCs using the Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960), how confluent should my cells be on the day of transfection?

When generating iPSCs using the Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960) cells should be approximately 75-90% confluent on the day of transfection (Day 0). Since over-confluency results in decreased transfection efficiency, we recommend replating overly confluent cells to achieve 75-90% confluency on the day of transfection.

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How many reprogramming experiments can I perform with the Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960)?

The Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No. A15960) provides enough material to process 20 reprogramming experiments (each reprogramming experiment requires 1 × 10⁵ cells and 1 µL each of the Epi5 Reprogramming Vectors and the Epi5 p53 & EBNA Vectors). Each vial of vectors in the kit contains 20 µL, and you will use 1 µL (from each vial) per experiment. Before use, briefly centrifuge the thawed vectors to collect them at the bottom of the tube.

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Which kits do you offer for stem cell reprogramming?

We offer the Invitrogen CytoTune-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit (Cat. Nos. A16517, A16518) which is a non-integrating system that uses Sendai virus vectors to reprogram somatic cells into induced pluripotent stem cells (iPSCs). The Invitrogen CytoTune-iPS 2.0 Sendai Reprogramming Kit contains three Invitrogen CytoTune 2.0 reprogramming vectors that are used for delivering and expressing key genetic factors necessary for reprogramming somatic cells into iPSCs. Only one application of the vectors is required for successful reprogramming.

Additionally, we offer the Episomal iPSC Reprogramming Vectors (Cat. No A14703) or Epi5 Episomal iPSC Reprogramming Kit (Cat. No A15960). This is a non-integrating system that reprograms somatic cells into induced pluripotent stem cells (iPSCs). These two products contain a mixture of six or five vectors designed to provide the optimal system for generating transgene-free and virus-free iPSCs in a feeder-free environment. Originally developed by Junying Yu and James Thomson (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19325077) and further optimized by Cellular Dynamics International, these Episomal iPSC Reprogramming Vectors have proven successful in reprogramming a number of different somatic cell types.

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Citations et références (2)

Citations et références

Abstract

An optogenetic approach for assessing formation of neuronal connections in a co-culture system.

Authors:Su CT, Yoon SI, Marcy G, Chin EW, Augustine GJ, Goh EL,

Journal:

PubMed ID:25742527

'Here we describe a protocol to generate a co-culture consisting of 2 different neuronal populations. Induced pluripotent stem cells (iPSCs) are reprogrammed from human fibroblasts using episomal vectors. Colonies of iPSCs can be observed 30 days after initiation of fibroblast reprogramming. Pluripotent colonies are manually picked and grown in neural ... More

Generation of human iPSCs from cells of fibroblastic and epithelial origin by means of the oriP/EBNA-1 episomal reprogramming system.

Authors:Drozd AM, Walczak MP, Piaskowski S, Stoczynska-Fidelus E, Rieske P, Grzela DP,

Journal:

PubMed ID:26088261

The prospect of therapeutic applications of the induced pluripotent stem cells (iPSCs) is based on their ability to generate virtually any cell type present in human body. Generation of iPSCs from somatic cells has opened up new possibilities to investigate stem cell biology, to better understand pathophysiology of human diseases, ... More