Alexa Fluor™ 647 est un colorant rouge lointain vif et photostable, avec un niveau d’excitation parfaitement adapté à la ligne laser de 633 nm. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 647 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. Invisible pour l’œil humain, la fluorescence de ce colorant Alexa Fluor™ à grande longueur d’onde peut être facilement détectée par la plupart des systèmes d’imagerie. En plus de formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 647 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules (en savoir plus).

L’ester NHS (ou ester de succinimidyle) Alexa Fluor™ 647 est l’outil le plus populaire pour conjuguer le colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH₂) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor™ qui en résulte présente une plus grande fluorescence et une meilleure photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectralement similaires.

Pour plus d’informations sur cet ester AlexaFluor™ NHS :

marquage du fluorophore : Colorant Alexa Fluor™ 647
Groupe de réactifs : Ester NHS
Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
Ex/Em du conjugué : 651/672 nm
Coefficient d’extinction : 270 000 cm-1M-1
Colorants similaires sur le plan spectral : Cy5™
Poids moléculaire : ∼ 1250

Réaction de conjugaison classique
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou n’importe quel peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous vous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, à l’aide de trois rapports molaires différents entre le réactif et la protéine.

L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissolu dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1–0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Étant donné que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino de lysine epsilon, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif du terminus d’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification de conjugués
Les anticorps marqués sont généralement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, telle que Sephadex™ G-25, Biogel™ P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous proposons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugués d’anticorps :
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 20 à 50 μg (A33087)
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 50 à 100 μg (A33088)

En savoir plus sur le marquage des protéines et des anticorps
Nous offrons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines de Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez Kits de marquage des protéines et des acides nucléiques, section 1.2 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous vous préparerons un conjugué sur mesure
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous vous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.