Alexa Fluor™ 680 NHS Ester (Succinimidyl Ester)
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Alexa Fluor™ 680 NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Alexa Fluor™ 680 est un colorant vif et photostable proche de l’IR qui est spectralement similaire au colorant Cy5.5. UtiliséAfficher plus
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RéférenceQuantité
A201085 mg
A375743 x 100 μg
A200081 mg
A3756725 mg
Référence A20108
Prix (EUR)
3 210,00
Each
Quantité:
5 mg
Prix (EUR)
3 210,00
Each
Alexa Fluor™ 680 est un colorant vif et photostable proche de l’IR qui est spectralement similaire au colorant Cy5.5. Utilisé pour une génération de signal stable en imagerie et en cytométrie de flux, le colorant Alexa Fluor™ 680 est hydrosoluble et insensible au pH de pH 4 à pH 10. Invisible pour l’œil humain, la fluorescence de ce colorant Alexa Fluor™ à grande longueur d’onde peut être facilement détectée par la plupart des systèmes d’imagerie. En plus de formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant Alexa Fluor™ 680 conjugué à divers anticorps, peptides, protéines, traceurs et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection de cellules (en savoir plus).

L’ester NHS (ou ester de succinimidyle) Alexa Fluor™ 680 est l’outil le plus populaire pour conjuguer le colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH2) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Le conjugué Alexa Fluor™ qui en résulte présente une plus grande fluorescence et une meilleure photostabilité que les conjugués d’autres fluorophores spectralement similaires.

Pour plus d’informations sur cet ester AlexaFluor™ NHS :

marquage du fluorophore : Colorant Alexa Fluor™ 680
Groupe de réactifs : Ester NHS
Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
Ex/Em du conjugué : 684/707 nm
Coefficient d’extinction : 183 000 cm-1M-1
Colorants similaires sur le plan spectral : Cy5.5

Réaction de conjugaison typique
Vous pouvez conjuguer des réactifs amino-réactifs avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). Vous pouvez adapter la taille de la réaction à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous vous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, à l’aide de trois rapports molaires différents entre le réactif et la protéine.

L’ester NHS Alexa Fluor™ est typiquement dissolu dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité (D12345), et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1–0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Étant donné que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino de lysine epsilon, vous pouvez obtenir un marquage plus sélectif du terminus d’amine en utilisant un tampon plus proche du pH neutre.

Purification de conjugués
Les anticorps marqués sont généralement séparés du colorant Alexa Fluor™ libre à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, telle que Sephadex™ G-25, Biogel™ P-30 ou équivalent. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous proposons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugués d’anticorps :
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 20 à 50 µg (A33087)
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 50 à 100 µg (A33088)

En savoir plus sur le marquage des protéines et des anticorps
Nous offrons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines de Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez Kits de marquage des protéines et des acides nucléiques, section 1.2 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous vous préparerons un conjugué sur mesure
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous vous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Réactivité chimiqueAmine
Émission707 nm
Excitation684 nm
Marqueur ou colorantAlexa Fluor™ 680
Type de produitColorant
Quantité5 mg
Groupement de réactifsEster actif, ester de succinimidyle
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
Type d’étiquetteColorants Alexa Fluor
Gamme de produitsAlexa Fluor
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Conserver au congélateur (-5 à -30°C) à l’abri de la lumière.

Foire aux questions (FAQ)

I am labeling a protein with Alexa Fluor 488 SDP ester. The manual recommends using a sodium bicarbonate buffer at pH 8.3. Can I use a different buffer instead?

Yes. The important thing is to use a buffered solution with a pH between 8.0 and 8.5. Do not use Tris buffer, which has amine groups. Most other buffers will work fine in that pH range. This is also true for other amine-reactive dyes, such as succinimidyl (NHS) esters or TFP esters.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

I am not going to use all of my Alexa Fluor succinimidyl ester reactive dye. Can I just make it up in DMSO and store aliquots at -20 degrees C?

This is not recommended. Any trace amounts of water in the DMSO can promote spontaneous hydrolysis over time. Even if using anhydrous DMSO, DMSO is hygroscopic; it readily absorbs moisture from the atmosphere over time. A better alternative is to dissolve the reactive dye in a volatile solvent, make smaller aliquots and then evaporate off the solvent using a vacuum pump. The smaller aliquots of solid reactive dye should then be stored frozen, desiccated and protected from light. Contact Technical Support by sending an email to techsupport@thermofisher.com for the recommended volatile solvent.

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Citations et références (17)

Citations et références
Abstract
A high-throughput, cell-based screening method for siRNA and small molecule inhibitors of mTORC1 signaling using the In Cell Western technique.
Authors:Hoffman GR, Moerke NJ, Hsia M, Shamu CE, Blenis J,
Journal:Assay Drug Dev Technol
PubMed ID:20085456
'The mTORC1 pathway is a central regulator of cell growth, and defective mTORC1 regulation plays a causative role in a variety of human diseases, including cancer, tumor syndromes such as the tuberous sclerosis complex (TSC) and lymphangioleiomyomatosis (LAM), and metabolic diseases such as diabetes and obesity. Given the importance of ... More
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