Conjugués de l’annexine V pour la détection de l’apoptose
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Conjugués de l’annexine V pour la détection de l’apoptose

Détectez les premiers stades de l’apoptose avec annexine V Alexa Fluor autonome, APC, Pacific Blue, PE, FITC, conjugués à la biotine au moyen de la cytométrie en flux.
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RéférenceExcitation / émissionFaisceaux laser du cytomètre en fluxConjugué
A35110650/660633-637APC (Allophycocyanine)
A13201495/519488Alexa Fluor 488
A13199494/518488FITC
A13202578/603532, 561Alexa Fluor 568
A13203590/617532Alexa Fluor 594
A13204Biotine-X
A23202346/442UVAlexa Fluor 350
A23204650/665633-637Alexa Fluor 647
A35108555/565532, 561Alexa Fluor 555
A35109679/702633-637Alexa Fluor 680
A35111565/578488, 532, 561PE
A35122410/455405Pacific Blue
Référence A35110
Prix (EUR)
968,00
Each
Excitation / émission:
650/660
Faisceaux laser du cytomètre en flux:
633-637
Conjugué:
APC (Allophycocyanine)
Prix (EUR)
968,00
Each
Parvenez à une détection rapide et fiable de l’apoptose cellulaire précoce grâce aux conjugués autonomes de l’annexine V pour la détection de l’apoptose. Les conjugués de l’annexine V offrent une différence jusqu’à 100 fois maximum dans l’intensité du signal de fluorescence entre les cellules apoptotiques et non apoptotiques au moyen de la cytométrie en flux.
L’annexine V présente une forte affinité pour la phosphatidylsérine (PS), qui devient exposée sur le feuillet externe des cellules soumises à l’apoptose. En raison de cette affinité, les réactifs V d’annexine V marqués par fluorescence sont couramment utilisés dans les recherches sur l’apoptose.

Les conjugués d’annexine V constituent une méthode de détection rapide et fiable pour l’étude de l’externalisation de la phosphatidylsérine, un indicateur des étapes intermédiaires de l’apoptose. La différence d’intensité de fluorescence entre les cellules apoptotiques et non apoptotiques colorées avec nos conjugués d’annexine V fluorescents, mesurés par cytométrie en flux, est généralement 100 fois supérieure environ.

En collaboration avec Nexins Research BV, nous fournissons les conjugués d’annexine V les plus brillants et de la meilleure qualité du marché, notamment les conjugués d’annexine V Alexa Fluor 350, 488, 555, 568, 594, 647 et 680, ainsi que les conjugués d’annexine V APC, Biotine-X, FITC, Pacific Blue et PE. Les conjugués d’annexine V hautement fluorescents constituent une méthode de détection rapide et fiable pour l’étude de l’externalisation de la phosphatidylsérine, un des indicateurs les plus précoces de l’apoptose.

Le conjugué d’annexine V Pacific Blue est excitable par le violet et est donc idéal pour les instruments à laser violet et pour les expériences multicolores qui incluent des colorants fluorescents verts ou rouges.

Les avantages de nos conjugués d’annexine V sont les suivants :
• Conjugué aux colorants Invitrogen Alexa Fluor et eFluor pour des signaux plus brillants
• Conjugués pour tous les lasers disponibles
• Disponibles en tant que réactifs autonomes ou kits faciles à utiliser

La coloration à l’annexine V pour détecter les cellules apoptotiques ne peut être effectuée que sur des cellules vivantes et des tissus. Si les échantillons doivent être fixés après coloration, des conditions spécifiques sont nécessaires pour obtenir une rétention transitoire du signal. Il s’agit notamment d’utiliser une méthode de fixation sans alcool et à base d’aldéhyde, d’utiliser des tampons contenant du Ca2+ et d’éviter des surfactants/détergents. Pour vous vous faciliter la tâche, nous proposons également un tampon de liaison à l’annexine concentrée qui facilite la liaison de l’annexine V à la phosphatidylsérine dans les dosages d’apoptose.

For Research Use Only. Not for use in diagnostic procedures.
Spécifications
CouleurRouge
DescriptionConjugué d’annexine V APC (annexine V APC) (remplace le produit annexine-annexine V05)
Excitation / émission650/660
Faisceaux laser du cytomètre en flux633-637
À utiliser avec (équipement)Cytomètre en flux
Nbre de réactions50
Type de produitConjugué d’anexine V
Quantité250 μL
Conditions d’expéditionGlace humide
ConjuguéAPC (Allophycocyanine)
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Contient 1 flacon d’annexine V, conjugué APC. Conserver au réfrigérateur (2°C à 8°C) et à l’abri de la lumière.

Foire aux questions (FAQ)

I trypsinized my adherent cells and labeled with annexin V, and now my flow data is showing a high percentage of apoptotic cells even for control, untreated cells. What is the problem?

Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. Allow the cells to recover for about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium after trypsinizing/scraping so that they can recover their membrane integrity before staining. For lightly adherent cell lines, such as HeLa and NIH 3T3, another option is to use non-enzyme treatments like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Can I detect annexin V staining in an imaging assay?

Annexin V staining is not typically used in imaging experiments; it is a better reagent for flow cytometry analysis. All cells will stain to some extent, so it can be difficult to distinguish a relatively bright annexin V-stained cell from a dimmer non-apoptotic cell. Caspase activation, detected using our CellEvent Caspase 3/7 or Image-iT LIVE Caspase detection kits, is a better method for detecting apoptosis in an imaging assay.

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When should I stain adherent cells with annexin V for flow cytometric analysis? Before or after I trypsinize them?

Trypsinize first and then allow the cells to recover about 30 minutes in optimal cell culture conditions and medium before staining with annexin V conjugates. Trypsinization or mechanical scraping of cells temporarily disrupts the plasma membrane, allowing for annexin V to bind phosphatidylserine on the cytoplasmic surface of the cell membrane and thus leading to false positive staining. For lightly adherent cell lines such as HeLa and NIH 3T3, you could use a less harsh (non-enzymatic) dissociation product like Gibco Cell Dissociation Buffer (Cat. No. 13151014).

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Can I fix my cells after annexin V staining?

Yes, this is possible. We have established protocols for annexin V staining combined with intracellular staining of lymphocytes that can be found here. The most important step is to leave some binding buffer in the suspension when fixation is started. Compared to staining of live cells, the intensity of the annexin V signal may be somewhat reduced.

I am trying to label adherent cells with annexin V and am finding that everything is getting labeled. How can I fix this?

Treating cells with trypsin or other reagents to detach adherent cells causes damage to the membrane, such that cells will be labeled with annexin V. The best way to avoid this problem is to allow your cells to recover for 30-45 min in the incubator. Swirl the tube/plate/flask every few minutes to prevent re-attachment. After this recovery period, you can label your cells with annexin V and analyze by flow cytometry.

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Citations et références (15)

Citations et références
Abstract
Simultaneous detection of apoptosis and mitochondrial superoxide production in live cells by flow cytometry and confocal microscopy.
Authors:Mukhopadhyay P, Rajesh M, Haskó G, Hawkins BJ, Madesh M, Pacher P
Journal:Nat Protoc
PubMed ID:17853886
'Annexin V and Sytox Green are widely used markers to evaluate apoptosis in various cell types using flow cytometry and fluorescent microscopy. Recently, a novel fluoroprobe MitoSOX Red was introduced for selective detection of superoxide in the mitochondria of live cells and was validated for confocal microscopy and flow cytometry. ... More
Cathepsin D and H2O2 stimulate degradation of thioredoxin-1: implication for endothelial cell apoptosis.
Authors:Haendeler J, Popp R, Goy C, Tischler V, Zeiher AM, Dimmeler S
Journal:J Biol Chem
PubMed ID:16263712
'Cathepsin D (CatD) is a lysosomal aspartic proteinase and plays an important role in the degradation of proteins and in apoptotic processes induced by oxidative stress, cytokines, and aging. All of these stimuli are potent inducers of endothelial cell apoptosis. Therefore, we investigated the role of CatD in endothelial cell ... More
Role of superoxide, nitric oxide, and peroxynitrite in doxorubicin-induced cell death in vivo and in vitro.
Authors:Mukhopadhyay P, Rajesh M, Bátkai S, Kashiwaya Y, Haskó G, Liaudet L, Szabó C, Pacher P,
Journal:Am J Physiol Heart Circ Physiol
PubMed ID:19286953
'Doxorubicin (DOX) is a potent available antitumor agent; however, its clinical use is limited because of its cardiotoxicity. Cell death is a key component in DOX-induced cardiotoxicity, but its mechanisms are elusive. Here, we explore the role of superoxide, nitric oxide (NO), and peroxynitrite in DOX-induced cell death using both ... More
FTY720 increases CD74 expression and sensitizes mantle cell lymphoma cells to milatuzumab-mediated cell death.
Authors:Alinari L, Mahoney E, Patton J, Zhang X, Huynh L, Earl CT, Mani R, Mao Y, Yu B, Quinion C, Towns WH, Chen CS, Goldenberg DM, Blum KA, Byrd JC, Muthusamy N, Praetorius-Ibba M, Baiocchi RA,
Journal:Blood
PubMed ID:22042694
'Mantle cell lymphoma (MCL) is an aggressive B-cell malignancy with a short median survival despite multimodal therapy. FTY720, an immunosuppressive drug approved for the treatment of multiple sclerosis, promotes MCL cell death concurrent with down-modulation of phospho-Akt and cyclin D1 and subsequent cell-cycle arrest. However, the mechanism of FTY720-mediated MCL ... More
Flow cytometry-based apoptosis detection.
Authors:Wlodkowic D, Skommer J, Darzynkiewicz Z,
Journal:Methods Mol Biol
PubMed ID:19609746
'An apoptosing cell demonstrates multitude of characteristic morphological and biochemical features, which vary depending on the stimuli and the cell type. The gross majority of classical apoptotic hallmarks can be rapidly examined by flow and image cytometry. Cytometry thus became a technology of choice in diverse studies of cellular demise. ... More