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Kit de transcription mMESSAGE mMACHINE™ T7
Les kits mMESSAGE mMACHINE™ sont conçus pour la synthèse in vitro de grandes quantités d’ARN coiffé. L’ARN coiffé mime laAfficher plus
| Référence | Quantité |
|---|---|
| AM1344 | 25 réactions |
Référence AM1344
Prix (EUR)
898,00
Each
Quantité:
25 réactions
Prix (EUR)
898,00
Each
Les kits mMESSAGE mMACHINE™ sont conçus pour la synthèse in vitro de grandes quantités d’ARN coiffé. L’ARN coiffé mime la plupart des ARNm trouvés in vivo parce qu’il possède une coiffe de 7-méthyl guanosine à l’extrémité 5’. Le kit mMESSAGE mMACHINE™ permet la réaction de transcription à ultra-haut rendement de l’analogue de coiffe [m7G(5’)ppp(5’)G]. L’analogue de coiffe est incorporé seulement en tant que premier ou 5’ terminal G du transcript car sa structure empêche son incorporation à d’autres positions de la molécule d’ARN.
Fonctionnement des kits mMESSAGE mMACHINE™
Les kits mMESSAGE mMACHINE™ possèdent un format de réaction simplifié au cours duquel les quatre ribonucléotides et l’analogue de coiffe sont mélangés dans une seule solution. Le rapport analogue:GTP de cette solution est de 4:1, ce qui est idéal pour maximiser le rendement en ARN et la proportion de transcrits coiffés. Les kits mMESSAGE mMACHINE™ conviennent très bien à la synthèse de routine des ARN coiffés pour la microinjection d’ovocytes, la traduction in vitro, la transfection et d’autres applications. Les rendements élevés sont obtenus en optimisant les conditions de réaction de la synthèse d’ARN en présence de fortes concentrations de nucléotides. De plus, l’ARN synthétisé est protégé contre la dégradation par toute ribonucléase contaminante pouvant être présente avec l’inhibiteur de RNase, un composant du mélange enzymatique.
Utilisation des kits mMESSAGE mMACHINE™
Dans une réaction de 20 µl pendant une incubation de 2 heures, la transcription de l’ARN à coiffe à rendement élevé mMESSAGE mMACHINE™ produira de grandes quantités de masse d’ARN à coiffe. Jusqu’à 10 à 50 fois le rendement obtenu avec les réactions de transcription in vitro classiques. Le rapport analogue de coiffe:GTP a été optimisé pour atteindre le meilleur compromis entre rendement (15 à 35 µg) et proportion de transcripts à coiffe (80 %). Les kits mMESSAGE mMACHINE™ contiennent également une solution de précipitation LiCl qui sépare efficacement les protéines et les nucléotides non incorporés (y compris les analogues de coiffe libres) des ARN à coiffe, augmentant l’efficacité de la translation. Les kits mMESSAGE mMACHINE™ ne sont optimisés que pour l’utilisation des polymérases incluses dans le kit. Le recours à une autre polymérase risque de conduire à de faibles rendements. Les kits mMESSAGE mMACHINE™ contiennent tous les tampons et réactifs nécessaires pour réaliser 25 réactions de transcription. En utilisant le modèle de contrôle fourni avec les kits (facteur d’élongation Xenopus 1α, pTRI Xef), chaque réaction mMESSAGE mMACHINE™ produira environ 20 à 30 µg d’ARN avec l’ARN polymérase T3 ou T7, ou environ 15 à 25 µg d’ARN avec l’ARN polymérase SP6.
Fonctionnement des kits mMESSAGE mMACHINE™
Les kits mMESSAGE mMACHINE™ possèdent un format de réaction simplifié au cours duquel les quatre ribonucléotides et l’analogue de coiffe sont mélangés dans une seule solution. Le rapport analogue:GTP de cette solution est de 4:1, ce qui est idéal pour maximiser le rendement en ARN et la proportion de transcrits coiffés. Les kits mMESSAGE mMACHINE™ conviennent très bien à la synthèse de routine des ARN coiffés pour la microinjection d’ovocytes, la traduction in vitro, la transfection et d’autres applications. Les rendements élevés sont obtenus en optimisant les conditions de réaction de la synthèse d’ARN en présence de fortes concentrations de nucléotides. De plus, l’ARN synthétisé est protégé contre la dégradation par toute ribonucléase contaminante pouvant être présente avec l’inhibiteur de RNase, un composant du mélange enzymatique.
Utilisation des kits mMESSAGE mMACHINE™
Dans une réaction de 20 µl pendant une incubation de 2 heures, la transcription de l’ARN à coiffe à rendement élevé mMESSAGE mMACHINE™ produira de grandes quantités de masse d’ARN à coiffe. Jusqu’à 10 à 50 fois le rendement obtenu avec les réactions de transcription in vitro classiques. Le rapport analogue de coiffe:GTP a été optimisé pour atteindre le meilleur compromis entre rendement (15 à 35 µg) et proportion de transcripts à coiffe (80 %). Les kits mMESSAGE mMACHINE™ contiennent également une solution de précipitation LiCl qui sépare efficacement les protéines et les nucléotides non incorporés (y compris les analogues de coiffe libres) des ARN à coiffe, augmentant l’efficacité de la translation. Les kits mMESSAGE mMACHINE™ ne sont optimisés que pour l’utilisation des polymérases incluses dans le kit. Le recours à une autre polymérase risque de conduire à de faibles rendements. Les kits mMESSAGE mMACHINE™ contiennent tous les tampons et réactifs nécessaires pour réaliser 25 réactions de transcription. En utilisant le modèle de contrôle fourni avec les kits (facteur d’élongation Xenopus 1α, pTRI Xef), chaque réaction mMESSAGE mMACHINE™ produira environ 20 à 30 µg d’ARN avec l’ARN polymérase T3 ou T7, ou environ 15 à 25 µg d’ARN avec l’ARN polymérase SP6.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
À utiliser avec (application)Transcription in vitro, ARNm synthétique, ARNm, transfection, LNP, GENEart, plasmide d’ADN linéarisé, administration, produits de PCR
Nbre de réactions25 réactions
Gamme de produitsAmbion, mMESSAGE mMACHINE
Type de produitKit de transcription in vitro T7
AccélérateurT7
Quantité25 réactions
Conditions d’expéditionGlace carbonique
Matériau de départProduits de PCR, plasmide d’ADN linéarisé
Rendement20 à 30 μg
Type de produit finalARNm synthétique, ARNm
FormatKit
Type d’échantillonARNm, ARNm synthétique
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Mélange enzymatique T7,solution CAP⁄2XNTP de tampon de réaction 10X, solution GTP, pTRI-Xef, DNase TURBO, solution d’arrêt d’acétate d’ammonium, solution de précipitation de chlorure de lithium et tampon de chargement sur gel II sont tous stockés à -20°C. L’eau exempte de nucléase peut être conservée à n’importe quelle température.