Kit de transcription mMESSAGE mMACHINE™ T7 ULTRA

Le kit mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra associe un nouvel analogue de coiffe, à savoir l’analogue de coiffe anti-inverse (ARCA), à une technologie brevetée de transcription à haut débit pour générer des transcripts d’ARN qui produisent des rendements supérieurs de protéines par rapport aux autres transcripts après traduction. Avantages du kit mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra :

• Synthétise plus de protéines à partir d’ARN transcrit in vitro
• Exprime des transcripts d’ARN plus efficacement in vitro et in vivo
• Stabilise les transcripts in vivo avec des réactifs inclus pour la queue poly(A)

L’ARN coiffé ARCA est translationnellement plus actif
Une modification de base dans l’ARCA entraîne son incorporation dans l’orientation fonctionnelle et traductible uniquement ; l’analogue de coiffe traditionnel peut être incorporé dans les orientations fonctionnelles et non fonctionnelles. Par conséquent, l’incorporation de l’ARCA dans les réactions de transcription se solde par des ARN coiffés qui sont traduisibles à 100 %. Cela est amélioré par l’inclusion des extensions de poly(A) dans les transcripts mMESSAGE mMACHINE® T7 Ultra. Des expériences comparant les transcripts ARCA et ARCA / poly(A) à queue aux transcripts d’analogue de coiffe et d’analogue de coiffe / poly(A) à queue indiquent des niveaux plus élevés de synthèse protéique avec l’ARN à coiffe ARCA .

Qu’est-ce que l’ARCA ?
L’ARCA est un analogue de coiffe modifié dans lequel le groupe 3’ OH (plus proche de m⁷G) est remplacé par OCH₃ (voir le schéma). Suite à cette substitution, l’ARN polymérase peut uniquement initier la transcription avec le groupe d’hydroxyle restant, ce qui force l’incorporation de l’ARCA en orientation avant. Par conséquent, 100 % des transcripts synthétisés avec l’ARCA à l’extrémité 5’ sont traductibles, ce qui conduit à un fort effet stimulateur sur la translation.

Coiffage correct de l’ARN transcrit in vitro
Le coiffage correct de l’ARN favorise l’initiation correcte de la synthèse protéique, ainsi que la stabilité et le traitement de l’ARNm in vivo. L’ARN non coiffé est rapidement dégradé par les RNase cellulaires après la microinjection ou la transfection dans les cellules. En règle générale, l’ARN coiffé est traduit plus efficacement dans les systèmes de traduction in vitro, ce qui génère des ARN avec l’analogue de coiffe incorporé uniquement dans l’orientation fonctionnelle. C’est pourquoi, la substitution de l’analogue de coiffe classique par l’ARCA se solde par la synthèse des ARN coiffés qui sont traduisibles à 100 %.