DNase I Ambion™ (sans RNase)

Ambion DNase I (exempte de RNase) (E.C. 3.1.21.1) est une endonucléase non spécifique, qui dégrade l’ADN simple/double brin et la chromatine. Elle fonctionne en hydrolysant les liaisons phosphodiester, en produisant des mononucléotides et des oligonucléotides avec un groupe de 5’-phosphate et de 3’-hydroxyle. La DNase I exempte de RNase présente une pureté optimale. Elle est recommandée pour dégrader l’ADN en présence d’ARN lorsque l’absence de RNase est essentielle pour garantir l’intégrité de l’ARN. Ainsi, la DNase I est fréquemment utilisée pour éliminer le modèle d’ADN suite à une transcription in vitro et pour éliminer l’ADN contaminant dans les préparations d’ARN total (en particulier des cellules transfectées susceptibles de contenir de l’ADN plasmidique) utilisées pour les dosages de protection de la ribonucléase, la contraction de la bibliothèque d’ADNc et la RT-PCR. La DNase I exige des cations bivalents (Mg²⁺ et Ca²⁺ à environ 5 mM et 0,5 mM, respectivement) pour optimiser l’activité et son pH optimal est 7,8.

La DNase I exempte de Rnase surpasse la concurrence
Un rapport de recherche chez BioTechniques (Matthews et al., 32 : 1412-1417, 2002) a comparé la contamination à la RNase dans les préparations de DNase I issues de Sigma, Roche, Applied Science, Qiagen et Ambion. Les résultats ont révélé que “...à l’exception de la DNase I exempte de RNase d’Ambion™, l’intégrité de l’ARNc issu des réactions de transcription in vitro était compromise et restait contaminée à l’ADN. La DNase d’Ambion™ a été utilisée pour les expériences restantes exigeant la digestion de la DNase...”. La DNase I d’Ambion™ est testée pour détecter la RNase contaminante et l’activité des protéases. La fonctionnalité est déterminée par la digestion de l’ADN génomique humain, suivie de la PCR quantitative en temps réel afin de détecter tout ADN non digéré.

Définition de l’unité
Une unité correspond à la quantité d’enzyme nécessaire pour dégrader entièrement 1 µg d’ADN en 10 minutes à 37°C, ce qui équivaut à 0,04 Kunitz.

Produits accessoires
Comme alternative à la DNase I bovine, envisagez la DNase I recombinante (No de catalogue AM2235). Si vous recherchez une DNase plus active et tolérante au sel, consultez les produits TURBO™ DNase (No de catalogue AM2239 et AM2238).