Kit de prolifération cellulaire EdU Click-iT™ pour imagerie, colorant Alexa Fluor™ 555
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Kit de prolifération cellulaire EdU Click-iT™ pour imagerie, colorant Alexa Fluor™ 555

Le kit de prolifération Click-iT EdU Alexa Fluor pour l'imagerie est une alternative supérieure aux essais de prolifération traditionnels ;Afficher plus
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RéférenceQuantité
C103381 kit
Référence C10338
Prix (EUR)
848,00
Each
Quantité:
1 kit
Prix (EUR)
848,00
Each
Le kit de prolifération Click-iT EdU Alexa Fluor pour l'imagerie est une alternative supérieure aux essais de prolifération traditionnels ; il est optimisé pour les applications de microscopie par fluorescence. Dans ce dosage, l’EdU analogue à la thymidine modifiée est efficacement incorporé à l’ADN fraîchement synthétisé et il est marqué de façon fluorescente avec le colorant brillant et photostable Alexa Fluor™ dans une réaction clic rapide et hautement spécifique. Ce marquage fluorescent des cellules en prolifération est précis et compatible avec les méthodes d’anticorps en raison du protocole à clic léger.

• Simple—fonctionne la première fois, à chaque fois, en moins de temps
• Efficace—aucune étape de dénaturation ou traitement sévère requis
• Résultats riches en contenu—meilleure préservation de la morphologie cellulaire, de la structure antigénique et de l’intégrité de l’ADN
• Homogène—ne dépend pas de lots d’anticorps variables pour la détection

Les méthodes de détection de prolifération les plus précises sont basées sur l’incorporation et la mesure d’analogues nucléosidiques dans l’ADN nouvellement synthétisé, la bromodésoxyuridine (BrdU) étant un analogue couramment utilisé. L’ADN marqué par le BrdU est quantifié à l’aide d’anticorps anti-BrdU suite à la dénaturation de l’ADN par des méthodes agressives (HCl, chaleur ou enzymes) afin d’exposer les molécules de BrdU. Cette étape est chronophage et difficile à réaliser de façon constante. Le traitement rigoureux peut également nuire à l’intégrité et à la qualité de l’échantillon, ce qui rend difficile la co-coloration avec d’autres anticorps.

Méthodologie de prolifération supérieure
Le kit de prolifération cellulaire Click-iT EDU pour imagerie offre une alternative supérieure aux dosages BrdU pour mesurer la prolifération cellulaire. L’EdU (5-éthynyl-2’-déoxyuridine) est un analogue nucléosidique de la thymidine ; il est incorporé à l’ADN au cours de la synthèse de l’ADN active. Avec le kit Click-iT™ EdU, une fixation légère et la perméabilisation du détergent suffisent pour que le réactif de détection basé sur les petites molécules Click-iT™ EdU ait accès à l’ADN. Par conséquent, le kit d’imagerie Click-iT™ EdU n’est pas seulement facile à utiliser, il est aussi plus précis et compatible avec l’analyse des cycles cellulaires et d’autres cibles intra- ou extracellulaires pour des résultats réellement riches en contenu.

Ce kit est optimisé pour les applications de microscopie à fluorescence ; consultez la zone de technologie Click-iT™ de notre site Web pour les kits conçus pour les plateformes d’imagerie à haute densité, de microplaques à fluorescence ou de cytométrie en flux.

En savoir plus sur la technologie Click-iT >
Trouvez plus d’outils pour la détection basée sur l’image des cellules en prolifération >

Remarques :
Le dosage Click-iT™ peut être utilisé sur les cellules en culture ou in vivo suite à l’administration d’EdU par des méthodes nourricières ou d’injection.
Le dosage Click-iT™ peut être utilisé avec la BrdU dans les expériences à impulsion double à l’aide de l’anticorps anti-BrdU (clone MoBu-1) qui ne présente pas de réaction croisée avec l’EdU.
La technologie Click-iT™ est compatible avec les colorants immunohistochimiques, immunocytochimiques et fluorescents qui tolèrent la fixation ou qui sont conçus pour le marquage des cellules fixées.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Méthode de détectionFluorescence, Fluorescent
Type de colorantAlexa Fluor™ 555
FormatLame(s), Lame(s)
Quantité1 kit
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
CouleurOrange
EmissionVisible
À utiliser avec (application)Test de prolifération
À utiliser avec (équipement)Microscope à fluorescence, Microscope à fluorescence
Gamme de produitsAlexa Fluor, Click-iT
Type de produitKit de prolifération cellulaire
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Chaque kit contient suffisamment de matériau pour 50 à 250 réactions, en fonction du volume de réaction (généralement entre 0,1 et 0,5 ml).Conserver entre 2 et 6°C, desséché et à l’abri de la lumière.

Foire aux questions (FAQ)

I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Viability, Proliferation, Cryopreservation, and Apoptosis Support Center.

A control for a Click-iT EdU labeling experiment uses no EdU and the Click-iT reaction using Alexa Fluor 594 azide. The mouse heart tissue sections are showing non-specific labeling in red, seen in particular clusters of cells. They don't overlap with DAPI. What is the problem?

The problem is likely not the Alexa Fluor 594 azide. Since there are no alkynes endogenous to mouse tissue, there is nothing for the dye-azide to bind to. Since the background doesn't overlap with nuclei (DAPI signal), this isn't an issue of unintended EdU labeling. This red is autofluorescence from red blood cells; they autofluoresce in the red and don't have nuclei. This can be confirmed by checking a completely unlabeled tissue section (no dye present at all) to see if they are still present and by examining the cells at high magnification and looking for corpuscular shape.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

Can I combine Click-iT or Click-iT Plus reactions with phalloidin conjugates used for actin staining?

We do not recommend using phalloidin conjugates for staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions since phalloidin is extremely sensitive to the presence of copper.

For staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions, we recommend using anti-α-actin antibodies for staining actin in the cytoskeleton. You can find a list of our actin antibodies here.

Another option would be to use the Click-iT Plus Alexa Fluor Picolyl Azide Toolkit (Cat. Nos. C10641, C10642, C10643). These Click-iT Plus toolkits provide Copper and Copper protectant separately which makes it easier to titrate the copper concentration to obtain optimal labeling with minimal copper-mediated damage. You may need to optimize the click reaction with the lowest possible concentration of copper and then perform the phalloidin staining.

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Are the Alexa Fluor azides from Click-iT EdU kits available separately?

Yes, but the standalone products are not shipped at the same amount as provided in the Click-iT EdU kits; the amount of dye-azide provided in the Click-iT kits is proprietary information. See these catalog numbers for the stand alone products:
- Cat. No. A10266: Alexa Fluor 488 azide
- Cat. No. A10270: Alexa Fluor 594 azide
- Cat. No. A10277: Alexa Fluor 647 azide

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I am observing no signal or very low specific signal for my click-labeled samples. What can I do to improve the signal?

The click reaction is only effective when copper is in the appropriate valency. Azides and alkynes will not react with each other without copper. Make sure that the click reaction mixture is used immediately after preparation when the copper (II) concentration is at its highest.
Do not use additive buffer that has turned yellow; it must be colorless to be active.
Cells need to be adequately fixed and permeabilized for the TdT enzyme and click reagents to have access to the nucleus. Tissue samples require digestion with proteinase K or other proteolytic enzymes for sufficient TdT access.
Some reagents can bind copper and reduce its effective concentration available to catalyze the click reaction. Do not include any metal chelator (e.g., EDTA, EGTA, citrate, etc.) in any buffer or reagent prior to the click reaction. Avoid buffers or reagents that include other metal ions that may be o xidized or reduced. It may be help to include extra wash steps on the cell or tissue sample before performing the click reaction.
You can repeat the click reaction with fresh reagents to try to improve signal. Increasing the click reaction time longer than 30 minutes will not improve a low signal. Performing a second, 30 minute incubation with fresh click reaction reagents is more effective at improving labeling.
Your cells may not be apoptotic. Prepare a DNase I-treated positive control to verify that the TdT enzymatic reaction and click labeling reaction are working correctly.

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Citations et références (30)

Citations et références
Abstract
Control of mitochondrial structure and function by the Yorkie/YAP oncogenic pathway.
Authors:Nagaraj R, Gururaja-Rao S, Jones KT, Slattery M, Negre N, Braas D, Christofk H, White KP, Mann R, Banerjee U,
Journal:Genes Dev
PubMed ID:22925885
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