Le kit de capture d’ARN naissant Click-iT™ Nascent RNA Capture utilise notre chimie Click-iT™ exclusive pour capturer avec une efficacité et une sensibilité élevées les ARN nouvellement fabriqués. Grâce à l’approche Click-iT™, des études sur l’analyse à haute résolution de la régulation des gènes peuvent être effectuées en même temps que la régulation de l’ARN, la stabilité de l’ARN, la synthèse de l’ARN, la dégradation de l’ARN, la régulation transcriptionnelle, le delta⁄delta C(t), le run on⁄run off nucléaire et plus. Des homologues de ribonucléotide d’uridine d’éthylène (EU) contenant un groupe de réactifs à l’alcyne sont envoyés à des cellules ou à des tissus. Une fois le produit incorporé, les cellules sont lysées et l’ARN est isolé. Un azide de biotine est fixé dessus’, puis des microbilles magnétiques de strepavidine sont utilisées pour capturer le groupe d’ARN nouvellement synthétisé. Les ARN capturés sont ensuite amplifiés et les ADNc résultants sont utilisés dans un certain nombre de méthodologies après la capture. Nous l’avons validé pour des puces (densité faible et élevée), le séquençage sur SOLiD™ et l’analyse de delta CT par qPCR basée sur SYBR™ ou TaqMan™. Seules 25 000 cellules sont nécessaires pour l’analyse de transcripts nouvellement induits. Le kit permet 40 conditions pour le marquage et la capture qui peuvent ensuite être divisées en 400 essais analytiques distincts. Avec un prix d’environ un dollar par essai, c’est idéal pour les chercheurs dans le secteur académique et le domaine industriel.

Le réactif EU à la concentration recommandée de 200 µM est bien toléré par les cellules. Dans l’analyse d’une puce de plus de 32 000 gènes, nous avons pu détecter uniquement les modifications les plus mineures dans 12 d’entre eux, en comparaison à un véhicule de contrôle. De plus, à la concentration d’alimentation initiale de 5 x la valeur que nous recommandons (200 µM contre 1,0 mM), il n’y a eu aucun effet sur un panel de gènes domestiques, ni sur la capacité des cellules à proliférer normalement. La sensibilité et la fiabilité ont été confirmées dans une puce à faible densité (TLDA™) de gènes apoptotiques. Le groupe naissant capturé a trouvé avec précision tous les transcripts apoptotiques (induits par stauroporine) précédemment caractérisés, sans aucune modification détectable en termes d’informations des séquences.

*Découvrir, et pas simplement récupérer.* Au cours des dernières décennies, les efforts de la génomique ont révélé que seulement 2 % du génome humain comportait des protéines humaines codantes, laissant 98 % du génome avec une fonction inconnue (parfois appelé “Unknome”). Cette nouvelle approche aidera manifestement à découvrir le but et les schémas d’expression de ce vaste réservoir de séquences inconnues dans le domaine de la transcriptomique au cours de la présente décennie’.

*Capacité à étudier la stabilité de l’ARN * Pour d’autres, la capacité à découvrir la stabilité d’ARNm’, sans avoir besoin de radioactivité, sera le principal avantage offert ici. Par le passé, les demi vies des transcripts étaient dérivées avec des nucléotides radioactifs dans les expériences traditionnelles de run on et de run off nucléaires. Lourde et dangereuse, cette approche a connu une forte baisse – maintenant, ces valeurs essentielles peuvent être dérivées de manière simple et fiable, en toute sécurité.

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*Technologie Click-iT™ - Une seule réaction, une infinité de possibilités !*