Kit de dosage par cytométrie en flux Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488
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Kit de dosage par cytométrie en flux Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488

Le kit d’essai de cytométrie de flux Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 488 fournit un essai plus simple et plusAfficher plus
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RéférenceQuantité
C1042550 dosages
C10420100 analyses
Référence C10425
Prix (EUR)
598,65
Online Exclusive
798,00
Économisez 199,35 (25%)
Each
Quantité:
50 dosages
Prix (EUR)
598,65
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Le kit d’essai de cytométrie de flux Click-iT™ Plus EdU Alexa Fluor™ 488 fournit un essai plus simple et plus fiable pour analyser la réplication de l’ADN dans les cellules en prolifération par rapport aux méthodes BrdU traditionnelles. L’ADN nouvellement synthétisé est analysé avec le laser du cytomètre en flux à 488 nm.

Précis :Des résultats supérieurs par rapport aux essais BrdU
Rapide :Des résultats en seulement 90 minutes.
Économique :Plus de dosages par kit

Consultez notre guide de sélection de tous les dosages Click-iT™ EdU et Click-iT™ Plus EdU pour la cytométrie en flux.

Une méthode avancée dont les résultats sont supérieurs aux dosages BrdU
La méthode la plus précise pour analyser la prolifération consiste à mesurer directement la synthèse d’ADN. À l’origine, ceci était effectué en incorporant des nucléosides radioactifs (3H-thymidine) Cette méthode a été remplacée par la détection à base d’anticorps de l’analogue de nucléoside, bromodésoxyuridine (BrdU). L’essai de cytométrie de flux Click-iT™ Plus EdU est une alternative innovante à l’essai BrdU. EdU (5-éthynyl-2´-désoxyuridine) est un analogue de la thymidine, incorporé à l’ADN lors de la synthèse active de l’ADN. La détection se base sur la chimie clic, une réaction covalente entre un azide et un alcyne, catalysée par le cuivre. Dans cette application, l’alcyne se trouve dans la fraction éthynyle de l’EdU, alors que l’azide est couplé au colorant Alexa Fluor™ 488, Alexa Fluor™ 647 ou Pacific BlueTM. Les méthodes traditionnelles de cytométrie en flux sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules en phase S dans la population (Fig. 1).

Conditions douces lui permettant d’être utilisé avec des anticorps et des colorants de cycle cellulaire
Les avantages du marquage à l’EdU Click-iT™ deviennent rapidement évidents lors de la réalisation de l’essai (Fig. 2) La petite taille du colorant azide permet de détecter efficacement l’EdU incorporé dans des conditions douces, tandis que la fixation standard à base d’aldéhyde et la perméabilisation du détergent suffisent pour que le réactif de détection Click-iT™ puisse accéder à l’ADN. Par comparaison, les essais BrdU exigent de dénaturer l’ADN (à l’aide de HCl, de chaleur ou de digestion avec la DNase) pour exposer le BrdU afin qu’il puisse être détecté avec un anticorps anti-BrdU. Le traitement des échantillons en vue d’un essai BrdU peut entraîner l’altération de signal de la distribution du cycle cellulaire, ainsi que la destruction des sites de reconnaissance d’antigènes lorsque la méthode HCl est utilisée. Le kit de prolifération cellulaire EdU facile d’utilisation, lui, est compatible avec les colorants du cycle cellulaire. Ce kit d’essai biologique EdU peut également être multiplexé avec des anticorps contre des marqueurs intracellulaires et de surface.

Protocole rapide et simple
Le protocole Click-iT™ EdU se base sur la fixation de l’aldéhyde et les étapes de perméabilisation du détergent pour le marquage immunohistochimique des anticorps, mais l’EdU est compatible avec d’autres agents de
fixation/perméabilisation, dont la saponine et le méthanol. Vous serez prêt à analyser vos données de prolifération cellulaire après seulement cinq étapes :

• Traitez les cellules avec de l’EdUM
• Fixez et perméabilisez les cellules
• Détectez, en 30 minutes, les cellules en phase S avec le cocktail de détection Click-iT™ Plus.
• Lavez une fois
• Analysez

Des résultats précis et économiques
Grâce à l’augmentation du nombre d’essais par kit, le kit d’essai pour cytométrie en flux Click-iT™ EdU Alexa Fluor™ 488 se veut plus économique que les essais BrdU traditionnels et, donc, idéal pour les expériences de grande envergure.

Usage exclusivement réservé à la recherche. Non destiné à des fins thérapeutiques ou diagnostiques humaines ou animales.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Méthode de détectionFluorescence
Type de colorantAlexa Fluor™ 488
FormatTube(s)
Quantité50 dosages
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
Emission488
À utiliser avec (équipement)Cytomètre en flux
Gamme de produitsClick-iT
Type de produitKit de test pour cytométrie en flux
Unit SizeEach
Contenu et stockage
Contient de l’EDU (5-éthynyl-2’ -désoxyuridine), Alexa Fluor™ 488 à l’azoture, du diméthylsulfoxyde anhydre (DMSO),™ du fixateur Click-iT,™ du tampon de perméabilisation et de lavage Click-iT à base de saponine, du sulfate de cuivre (II) et™ de l’additif tampon Click-iT EDU.
  • Stocker de 2°C à 8°C
  • À déshydrater et à tenir à l’abri de la lumière.

    Foire aux questions (FAQ)

    I will be performing a cell proliferation assay using Click-iT EdU kit. At what point can I stop overnight, or do I have to perform all the steps continuously?

    One may store the sample after fixation overnight in PBS at 4oC. For longer storage (<1 week) , store in buffer with 1-2% formaldehyde or in formalin to limit microbial growth. If you use sodium azide as a microbial inhibitor, it must be completely removed prior to the Click-iT reaction.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Viability, Proliferation, Cryopreservation, and Apoptosis Support Center.

    Can I combine Click-iT or Click-iT Plus reactions with phalloidin conjugates used for actin staining?

    We do not recommend using phalloidin conjugates for staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions since phalloidin is extremely sensitive to the presence of copper.

    For staining actin in combination with traditional Click-iT or Click-iT Plus reactions, we recommend using anti-α-actin antibodies for staining actin in the cytoskeleton. You can find a list of our actin antibodies here.

    Another option would be to use the Click-iT Plus Alexa Fluor Picolyl Azide Toolkit (Cat. Nos. C10641, C10642, C10643). These Click-iT Plus toolkits provide Copper and Copper protectant separately which makes it easier to titrate the copper concentration to obtain optimal labeling with minimal copper-mediated damage. You may need to optimize the click reaction with the lowest possible concentration of copper and then perform the phalloidin staining.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    Are the Alexa Fluor azides from Click-iT EdU kits available separately?

    Yes, but the standalone products are not shipped at the same amount as provided in the Click-iT EdU kits; the amount of dye-azide provided in the Click-iT kits is proprietary information. See these catalog numbers for the stand alone products:
    - Cat. No. A10266: Alexa Fluor 488 azide
    - Cat. No. A10270: Alexa Fluor 594 azide
    - Cat. No. A10277: Alexa Fluor 647 azide

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    I am observing no signal or very low specific signal for my click-labeled samples. What can I do to improve the signal?

    The click reaction is only effective when copper is in the appropriate valency. Azides and alkynes will not react with each other without copper. Make sure that the click reaction mixture is used immediately after preparation when the copper (II) concentration is at its highest.
    Do not use additive buffer that has turned yellow; it must be colorless to be active.
    Cells need to be adequately fixed and permeabilized for the TdT enzyme and click reagents to have access to the nucleus. Tissue samples require digestion with proteinase K or other proteolytic enzymes for sufficient TdT access.
    Some reagents can bind copper and reduce its effective concentration available to catalyze the click reaction. Do not include any metal chelator (e.g., EDTA, EGTA, citrate, etc.) in any buffer or reagent prior to the click reaction. Avoid buffers or reagents that include other metal ions that may be o xidized or reduced. It may be help to include extra wash steps on the cell or tissue sample before performing the click reaction.
    You can repeat the click reaction with fresh reagents to try to improve signal. Increasing the click reaction time longer than 30 minutes will not improve a low signal. Performing a second, 30 minute incubation with fresh click reaction reagents is more effective at improving labeling.
    Your cells may not be apoptotic. Prepare a DNase I-treated positive control to verify that the TdT enzymatic reaction and click labeling reaction are working correctly.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Labeling Chemistry Support Center.

    I am observing high non-specific background when I image my Click-iT EdU TUNEL-labeled samples. What is causing this and what can I do to reduce the background?

    The click reaction is very selective between an azide and alkyne. No other side reactions are possible in a biological system. Any non-specific background is due to non-covalent binding of the dye to various cellular components. The Select FX Signal Enhancer is not effective at reducing non-specific charge-based binding of dyes following the click reaction; we do not recommend its use with the Click-iT detection reagents. The best method to reduce background is to increase the number of BSA washes. You should always do a no-dye or no-click reaction control under the same processing and detection conditions to verify that the background is actually due to the dye and not autofluorescence. You should also perform the complete click reaction on a no-TdT enzyme control sample to verify the specificity of the click reaction signal.

    Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

    Citations et références (9)

    Citations et références
    Abstract
    Inositol pyrophosphate synthesis by inositol hexakisphosphate kinase 1 is required for homologous recombination repair.
    Authors:Jadav RS, Chanduri MV, Sengupta S, Bhandari R,
    Journal:J Biol Chem
    PubMed ID:23255604
    'Inositol pyrophosphates, such as diphosphoinositol pentakisphosphate (IP(7)), are water-soluble inositol phosphates that contain high energy diphosphate moieties on the inositol ring. Inositol hexakisphosphate kinase 1 (IP6K1) participates in inositol pyrophosphate synthesis, converting inositol hexakisphosphate (IP(6)) to IP(7). In the present study, we show that mouse embryonic fibroblasts (MEFs) lacking IP6K1 ... More
    H. pylori virulence factor CagA increases intestinal cell proliferation by Wnt pathway activation in a transgenic zebrafish model.
    Authors:Neal JT, Peterson TS, Kent ML, Guillemin K,
    Journal:Dis Model Mech
    PubMed ID:23471915
    'Infection with Helicobacter pylori is a major risk factor for the development of gastric cancer, and infection with strains carrying the virulence factor CagA significantly increases this risk. To investigate the mechanisms by which CagA promotes carcinogenesis, we generated transgenic zebrafish expressing CagA ubiquitously or in the anterior intestine. Transgenic ... More
    CXCL12-CXCR4 signaling is required for the maintenance of mouse spermatogonial stem cells.
    Authors:Yang QE, Kim D, Kaucher A, Oatley MJ, Oatley JM
    Journal:J Cell Sci
    PubMed ID:23239029
    'Continual spermatogenesis relies on the activities of a tissue-specific stem cell population referred to as spermatogonial stem cells (SSCs). Fate decisions of stem cells are influenced by their niche environments, a major component of which is soluble factors secreted by support cells. At present, the factors that constitute the SSC ... More
    An organotypic coculture model supporting proliferation and differentiation of medullary thymic epithelial cells and promiscuous gene expression.
    Authors:Pinto S, Schmidt K, Egle S, Stark HJ, Boukamp P, Kyewski B,
    Journal:J Immunol
    PubMed ID:23269248
    Understanding intrathymic T cell differentiation has been greatly aided by the development of various reductionist in vitro models that mimic certain steps/microenvironments of this complex process. Most models focused on the faithful in vitro restoration of T cell differentiation and selection. In contrast, suitable in vitro models emulating the developmental ... More
    C/EBP homologous protein-induced macrophage apoptosis protects mice from steatohepatitis.
    Authors:Malhi H, Kropp EM, Clavo VF, Kobrossi CR, Han J, Mauer AS, Yong J, Kaufman RJ,
    Journal:
    PubMed ID:23720735
    Nonalcoholic fatty liver disease is a heterogeneous disorder characterized by liver steatosis; inflammation and fibrosis are features of the progressive form nonalcoholic steatohepatitis. The endoplasmic reticulum stress response is postulated to play a role in the pathogenesis of nonalcoholic fatty liver disease and nonalcoholic steatohepatitis. In particular, C/EBP homologous protein ... More