Le kit de dosage de cytométrie en flux Click-iT® Plus à l’EdU Alexa Fluor® 647 offre un test simplifié et plus fiable pour analyser la réplication de l’ADN dans les cellules en prolifération par rapport aux méthodes au BrdU traditionnelles. L’ADN nouvellement synthétisé est analysé avec le laser du cytomètre en flux à 647 nm. La formule Click-iT® Plus est compatible avec les fluorophores standard, y compris les R-PE et tandems R-PE, ainsi que les protéines fluorescentes.

• Multiplexable—compatible avec les R-PE (et tandems) et protéines fluorescentes
• Précis—résultats supérieurs par rapport aux dosages BrdU
• Rapide—résultats en moins de 60 minutes

Consultez le guide de sélection de tous les dosages Click-iT™ EdU et Click-iT™ Plus EdU pour la cytométrie en flux.

Multiplexable
La formulation Click-iT® Plus apporte des capacités de multiplexage améliorées par rapport aux dosages de cytométrie en flux Click-iT® EdU d’origine. Les immunodosages Click-iT® Plus à l’EdU peuvent être utilisés conjointement avec les R-PE et tandems R-PE, ainsi qu’avec les protéines fluorescentes telles que GFP et mCherry, sans perte de précision ni de vitesse par rapport au test Click-iT® à l’EdU d’origine.

Une méthode de pointe qui vous donne des résultats supérieurs au BrdU
La méthode la plus précise pour analyser la prolifération consiste à mesurer directement la synthèse de l’ADN. À l’origine, ceci était effectué en incorporant des nucléosides radioactifs. Cette méthode a été remplacée par la détection à base d’anticorps de l’analogue de nucléoside, bromodésoxyuridine (BrdU). L’essai de cytométrie de flux Click-iT® Plus EdU est une alternative innovante à l’essai BrdU. L’EdU (5-éthynyl-2´-désoxyuridine) est un analogue de la thymidine qui est incorporé à l’ADN lors de la synthèse active de l’ADN. La détection se base sur la chimie clic qui est une réaction covalente entre un azide et un alcyne catalysée par le cuivre. Dans cette application, l’alcyne se trouve dans la fraction éthynyle de l’EdU, alors que l’azide est couplé au colorant Alexa Fluor®. Les méthodes traditionnelles de cytométrie de flux sont utilisées pour déterminer le pourcentage de cellules en phase S dans la population.

Des conditions non agressives permettent une utilisation avec les anticorps et colorants de cycle cellulaire
La petite taille du colorant azoture permet de détecter efficacement l’EdU incorporé en utilisant des conditions douces, tandis que la fixation standard à base d’aldéhyde et la perméabilisation du détergent suffisent pour que le réactif de détection Click-iT® Plus puisse accéder à l’ADN. Par comparaison, les essais BrdU exigent de dénaturer l’ADN (à l’aide de HCl, de chaleur ou de digestion avec DNase) pour exposer le BrdU afin qu’il puisse être détecté avec un anticorps anti-BrdU. Le traitement des échantillons en vue d’un essai BrdU peut entraîner l’altération de signal de la distribution du cycle cellulaire, ainsi que la destruction des sites de reconnaissance d’antigènes lorsque la méthode HCl est utilisée. Par comparaison, l’essai Click-iT® Plus EdU est facile d’emploi et compatible avec les colorants de cycles cellulaires. Le dosage Click-iT® Plus EDU peut également être multiplexé avec des anticorps contre des marqueurs de surface et intracellulaires, ainsi que des conjugués marqués par des fluorophores standard tels que les R-PE, les tandems R-PE et les protéines fluorescentes (GFP et mCherry).

Protocole rapide et simple
Le protocole Click-iT® Plus EdU est basé sur la fixation de l’aldéhyde et les étapes de perméabilisation du détergent pour le marquage immunohistochimique des anticorps. Cependant, l’EdU est compatible avec d’autres agents de fixation / perméabilisation, dont la saponine et le méthanol. Vous serez prêt à analyser vos données de prolifération cellulaire après seulement cinq étapes :

1. Traitez les cellules avec EdU.
2. Fixez et perméabilisez les cellules.
3. Détectez les cellules en phase S avec le cocktail de détection Click-iT® Plus pendant 30 min.
4. Lavez une fois.
5. Analysez.

Les résultats sont obtenus en seulement 60 minutes dans certains cas, mais nous recommandons 90 minutes pour toutes les applications.