Kit de prolifération cellulaire EdU Click-iT™ Plus pour le colorant d’imagerie Alexa Fluor™ 488

Les kits d’imagerie Click-iT Plus EdU pour prolifération cellulaire ont été optimisés pour les applications de microscopie par fluorescence et offrent une alternative supérieure aux dosages de prolifération traditionnels. Dans ce dosage, l’EdU analogue à la thymidine modifiée (5-éthynyl-2’-désoxyuridine, un analogue nucléosidique de la thymidine) est efficacement incorporée à l’ADN fraîchement synthétisé et elle est marquée par fluorescence avec le colorant brillant et photostable Alexa Fluor™ dans une réaction clic rapide, hautement spécifique et modérée.

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• Simple—fonctionne dès la première fois, chaque fois, en moins de temps que les méthodes traditionnelles
• Efficace—aucune étape de dénaturation ou traitement agressif requis
• Résultats riches en contenu—meilleure conservation de la morphologie des cellules, de la structure des antigènes, du signal fluorescent de la GFP et de l’intégrité de l’ADN
• Constant—la détection n’est pas dépendante des lots d’anticorps variables

Le kit contient tous les composants requis pour marquer et détecter l’EdU incorporée, et pour analyser le cycle cellulaire sur des échantillons provenant de cellules adhérentes. Pour l’analyse du cycle cellulaire, le kit contient un colorant fluorescent bleu Hoechst 33342. Le kit contient suffisamment de réactif pour marquer 50 lamelles de 18 x 18 en utilisant 500 µl de tampon de réaction par test.

Évitez les traitements agressifs associés à la méthode BrdU
La mesure des changements de la prolifération cellulaire est une méthode fondamentale pour apprécier la santé des cellules, déterminer la génotoxicité et évaluer les médicaments anticancéreux. Pour cela, la méthode la plus précise consiste à mesurer directement la synthèse de l’ADN. La méthode traditionnelle consiste à utiliser l’analogue de nucléoside BrdU (5-bromo-2’-désoxyuridine, un analogue nucléosidique de la thymidine), qui est incorporé dans l’ADN nouvellement transcrit. Après incorporation, les échantillons sont soumis à des méthodes agressives (HCl, chaleur ou enzymes) pour dénaturer l’ADN et exposer les molécules de BrdU aux anticorps anti-BrdU. Cependant la méthode BrdU pour mesurer la prolifération cellulaire est chronophage et difficile à réaliser de façon systématique. Les traitements agressifs requis pour cette méthode peuvent nuire à l’intégrité des échantillons, à la morphologie cellulaire, à la qualité de l’image et à la capacité de multiplexer.

Le dosage Click-iT™ Plus EdU mesure la vitesse de la nouvelle synthèse d’ADN basée sur l’incorporation de l’EdU analogue nucléosidique dans l’ADN. La détection est obtenue par une réaction catalysée de type “clic” qui est achevée généralement en 30 minutes. La réaction clic utilise des groupes bioorthogonaux (biologiquement uniques) pour marquer de manière fluorescente les cellules en cours de prolifération, produisant un faible bruit de fond et une sensibilité de détection très élevée. Grâce aux conditions de réaction douces, les dosages Click-iT™ Plus peuvent évaluer précisément la prolifération cellulaire tout en préservant la morphologie cellulaire, l’intégrité de l’ADN, les sites de liaison de l’antigène et le signal fluorescent de GFP. La préservation de l’intégrité de l’ADN permet sa coloration, notamment la coloration avec des colorants utilisés pour l’analyse du cycle cellulaire.