Click-iT™ EdU Colorimetric IHC Detection Kit

Le kit de détection IHC (immunohistochimie) colorimétrique Click-iT™ EdU constitue une meilleure solution que les méthodes traditionnelles de détection colorimétrique des cellules en prolifération dans les coupes de tissu. Dans ce dosage, la 5-éthynyl-2’-déoxyuridine (EdU), un analogue nucléosidique de la thymidine contenant une fraction d’alcyne, est incorporé dans l’ADN nouvellement synthétisé. Lors de l’ajout de biotine contenant un groupe azoture, une brève “réaction de clic” fixe l’azoture à la fraction d’alcyne de la molécule d’EdU. Lors de l’ajout de streptavidine–peroxydase et d’un substrat peroxydase, une réaction enzymatique génère un signal pouvant être détecté par microscopie optique et stocké pour une analyse ultérieure.

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• Optimisé—permet la détection colorimétrique des cellules en prolifération dans des échantillons de tissus ou de cellules
• Efficace—aucune étape de dénaturation ou de traitement agressif requise
• Robuste—meilleure conservation de la morphologie cellulaire. L’environnement cellulaire offre des résultats riches en contenu
• Constant—la détection n’est pas dépendante des lots d’anticorps variables
• Simple—conçu pour fonctionner de façon reproductible, en moins de temps que les méthodes traditionnelles

Les méthodes classiques génèrent des résultats non reproductibles
La mesure des changements de la prolifération cellulaire est une méthode fondamentale pour estimer la santé des cellules, déterminer la génotoxicité et évaluer les médicaments anticancéreux. Pour cela, la méthode la plus précise consiste à mesurer directement la synthèse de l’ADN. La méthode traditionnelle consiste à utiliser l’analogue de nucléoside BrdU (5-bromo-2’-désoxyuridine, un analogue nucléosidique de la thymidine), qui est incorporé dans l’ADN nouvellement transcrit. Après incorporation, les échantillons sont soumis à des méthodes agressives (HCl, chaleur ou enzymes) pour dénaturer l’ADN et exposer les molécules de BrdU aux anticorps anti-BrdU. Ces traitements agressifs peuvent nuire à l’intégrité des échantillons, à la morphologie cellulaire et à la qualité de l’image. En outre, les problèmes liés à la variabilité de fabrication, à la liaison non spécifique et à la réactivité croisée peuvent entraîner des résultats incohérents.

Avantages par rapport aux autres dosages
Le kit de détection IHC (immunohistochimie) colorimétrique Click-iT EdU offre de nombreux avantages par rapport aux méthodes traditionnelles telles que le dosage BrdU. La petite taille de la fraction biotine-azoture permet une détection efficace de l’EdU incorporé en utilisant des conditions douces. Par contre, les dosages BrdU nécessitent des méthodes de dénaturation agressives à l’aide de HCl et/ou de récupération des épitopes induite par la chaleur (HIER). Contrairement au dosage BrdU, qui repose sur des anticorps pouvant parfois présenter une liaison non spécifique, le kit de détection IHC colorimétrique Click-iT EdU utilise un groupe bioorthogonal (biologiquement unique)—cela permet un signal de fond faible, des sensibilités de détection élevées et n’engendre aucun problème de réactivité croisée.

Le kit contient tous les composants nécessaires à la détection de l’EdU incorporé présent dans des échantillons tissulaires fixés au formol et inclus en paraffine (FFPE). Le kit contient suffisamment de réactif pour marquer cinquante (50) lamelles de 18 x 18 mm en utilisant 100 μl de réactif de réaction par test.