Kit de détection vert de sénescence par cytométrie en flux CellEvent™

Le kit de détection vert de sénescence CellEvent est constitué d’une sonde fluorescente et d’un tampon optimisé qui permettent la détection de cellules sénescentes. Cette sonde à base de fluorescéine contient deux fractions de galactoside, ce qui en fait une cible pour la β-galactosidase. L’activation de la β-galactosidase est couramment utilisée comme biomarqueur pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolytique réside dans les lysosomes et convertit les β-galactosides en monosaccharides dans des conditions de pH acide. Le produit clivé enzymatiquement est retenu dans la cellule en raison de la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogène qui a des maxima d’absorption/émission de 490/514 nm.

Les caractéristiques du kit de détection vert de sénescence CellEvent comprennent :
• Détection fluorescente fiable et rapide des cellules sénescentes
• Plus grande sensibilité que la x-gal colorimétrique traditionnelle
• Le signal fluorescent est bien conservé et détecté à l’aide des ensembles de filtres Alexa Fluor 488/FITC standard
• Compatible multiplexes—la sonde de sénescence fluorescente peut être multiplexée

En raison d’une durée de vie réplicative limitée, les cellules normales entrent dans l’arrêt du cycle cellulaire, également connu sous le nom de sénescence cellulaire. Pendant cette phase sénescente, les cellules restent métaboliquement actives sans subir de mort ou de division cellulaire. Elles adoptent un phénotype spécifique avec l’apparition de plusieurs noyaux, une vacuolisation accrue, l’expression de la β-galactosidase dépendante du pH ainsi que l’élargissement et l’extension morphologiques. La sénescence, par divers mécanismes, peut jouer un rôle dans la suppression tumorale, la progression tumorale, le vieillissement et la réparation tissulaire.

L’activation de la β-galactosidase est couramment utilisée comme biomarquage pour les cellules sénescentes. Cette enzyme hydrolytique réside dans les lysosomes et convertit les β-galactosides en monosaccharides dans des conditions de pH acide. L’activité est optimale à pH lysosomal 4, mais les dosages conventionnels mesurent à pH 6. Il a été démontré que l’activité de la β-galactosidase normalisée est deux fois plus élevée dans les cellules sénescentes que dans les cellules pré-sénescentes, quelle que soit la valeur de pH utilisée pour les dosages.

Un substrat colorimétrique pour la β-galactosidase, 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside (x-gal), a longtemps été utilisé pour détecter l’activité métabolique dans les cellules in vitro. Cependant, son utilisation est limitée en raison d’un signal incohérent, de la longueur du dosage et de l’incapacité à multiplexer.

Par conséquent, nous avons développé un substrat sensible et fluorescent pour la β-galactosidase qui peut être utilisé pour la détection de cellules sénescentes. La sonde de sénescence verte CellEvent est un réactif à base de fluorescéine qui contient deux fragments galactoside, ce qui en fait une cible spécifique de la β-galactosidase. Le produit clivé par l’enzyme est retenu dans la cellule en raison de la liaison covalente des protéines intracellulaires et émet un signal fluorogène qui a des maxima d’absorption/émission de 490/514 nm.

Le kit de sénescence vert CellEvent est constitué d’une sonde de sénescence verte CellEvent et d’un tampon optimisé pour la détection de cellules sénescentes dans des échantillons fixes. Cette sonde peut être multiplexée avec d’autres réactifs fluorescents compatibles avec la fixation du paraformaldéhyde.