Dosage de cytotoxicité de la LDH CyQUANT™, fluorescence

Le test de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, est un test fluorescent qui fournit une méthode simple et fiable pour déterminer la cytotoxicité cellulaire. La lactate déshydrogénase (LDH) est une enzyme cytosolique présente dans de nombreux types de cellules différents. Elle est libérée dans les milieux de culture cellulaire après avoir endommagé la membrane plasmique. Le dosage de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, fournit les réactifs pour mesurer précisément et quantitativement cette LDH extracellulaire.

Le dosage de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, comprend :
• Pratique—protocole de test add-mix-read pour les cellules adhérentes et en suspension, y compris les modèles de cellules 3D
• Précis—fournit une mesure quantitative de la libération de LDH
• Polyvalent—idéal pour le criblage à haut débit, surveillez la cytotoxicité du même échantillon au fil du temps
• Fiable—la formulation avec de la résazurine hautement purifiée donne une large plage dynamique de dosage

La LDH est une enzyme cytosolique présente dans de nombreux types de cellules différents et est un indicateur bien établi et fiable de la toxicité cellulaire. L’altération de la membrane plasmique entraîne une libération de la LDH dans les milieux de culture cellulaire environnants. Cette LDH extracellulaire peut être quantifiée par une réaction enzymatique couplée pendant laquelle la LDH catalyse la conversion du lactate en pyruvate via la réduction du NAD+ en NADH. La diaphorase utilise ensuite le NADH pour réduire la résazurine en résorufine qui peut être détectée en utilisant une excitation de 560 nm et une émission de 590 nm. Le niveau de formation de résorufine est directement proportionnel à la quantité de LDH libérée dans le milieu.

En conséquence des processus de synthèse et de fabrication, tous les réactifs à base de résazurine contiennent une quantité détectable de contamination par la résorufine. La quantité de contamination peut varier considérablement entre les sources du matériau et les conditions de fabrication, ce qui contribue à des différences dans la fluorescence de fond détectable. Plus important encore, la résorufine contaminante réduit le rapport signal/fond et la plage dynamique du dosage. Un procédé innovant a été développé pour éliminer la résorufine contaminante, permettant d’obtenir la résazurine très pure utilisée dans le test de cytotoxicité CyQUANT™ LDH, fluorescence.

Le test de cytotoxicité CyQUANT LDH, fluorescence, fournit les réactifs nécessaires à la quantification simple et fiable de la cytotoxicité cellulaire basée sur la fluorescence. Le kit peut être utilisé avec différents types de cellules, y compris des modèles cellulaires 3D, pour mesurer la cytotoxicité médiée par des composés chimiques ainsi que la cytotoxicité à médiation cellulaire. Étant donné que la LDH dans les milieux est l’indicateur de cytotoxicité cellulaire, l’essai peut être utilisé pour surveiller la cytotoxicité à partir du même échantillon au fil du temps. Pour effectuer cet essai, une aliquote issue des milieux de culture cellulaire est transférée sur une nouvelle plaque et le mélange de réaction est ajouté. Après une incubation de 10 minutes, la réaction est arrêtée en ajoutant une solution d’arrêt et la fluorescence est mesurée à l’aide d’un lecteur de microplaques.