Invitrogen™

TOP10 Electrocomp™ Kit

Name: TOP10 Electrocomp™ Kit
SKU: C66455
Price: 342.65 EUR

Les cellules E. coli TOP10 sont fournies à une efficacité de transformation de 1 × 1010 cfu/µg d’ADN superenroulé etAfficher plus

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Référence	Quantité
C66455	5 x 100 μl
C66411	10 x 100 μl

2 options

Référence C66455

Prix (EUR)

342,65

Online Exclusive

353,00

Économisez 10,35 (3%)

Each

Quantité:

5 x 100 μl

Prix (EUR)

342,65

Online Exclusive

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Les cellules E. coli TOP10 sont fournies à une efficacité de transformation de 1 × 10¹⁰ cfu/µg d’ADN superenroulé et sont idéales pour le clonage hautement efficace et la propagation plasmidique. Elles permettent une réplication stable d’un nombre élevé de copies de plasmides.

Le génotype des cellules TOP10 est similaire à la souche DH10B™ et offre les caractéristiques suivantes :

• hsdR pour la transformation efficace de l’ADN non méthylé à partir d’amplifications par PCR
• mcrA pour une transformation efficace de l’ADN méthylé à partir de préparations génomiques
• lacZΔM15 pour la sélection des couleurs bleu / blanc des clones recombinants
• endA1 pour des préparations plus propres de l’ADN et de meilleurs résultats dans les applications en aval en raison de l’élimination de la digestion non spécifique par endonucléase I
• recA1 pour une fréquence réduite de recombinaison non spécifique dans l’ADN cloné

Des kits TOP10 One Shot™ sont disponibles avec les cellules chimiquement compétentes ou électrocompétentes desE. coli pour répondre à vos besoins spécifiques de transformation. Les E. coli TOP10 sont également disponibles au format MultiShot™ à haut débit.

Remarque : Ce kit contient suffisamment de cellules électrocompétentes pour 12 réactions de 40 µl ou 25 réactions de 20 µl. Veuillez consulter le manuel du produit pour obtenir des recommandations sur l’échelle de réaction.

Génotype :
F^- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 araD139 Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG

Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.

Spécifications

Résistance aux antibiotiques des bactériesYes (Streptomycin)

Sélection bleue / blancheOui

Clonage d’ADN méthyléOui

Clonage d’ADN instableNe convient pas au clonage d’ADN instable

Contient l’épisome FNo

Compatibilité à haut débitNon compatible avec le haut débit (manuel)

Améliore la qualité des plasmidesOui

PlasmidePeut être utilisé pour les plasmides > 20 kb

Préparation de l’ADN non méthyléNon adapté à la préparation de l’ADN non méthylé

Gamme de produitsElectrocomp

Type de produitKit d’électroporateur

Quantité5 x 100 μl

Réduit la recombinaisonOui

Conditions d’expéditionDry Ice

Résistant au phage T1 (tonA)Non

Niveau d’efficacité de la transformationHaute efficacité (> 10^9 cfu⁄µg)

FormatTube

EspècesE. coli

Unit SizeEach

Contenu et stockage

• 5 x 100μL TOP10 Electrocomp E. coli
• 50 μL pUC19 vector (10 pg/μL)
Store at –80°C.

• S.O.C. Medium (15 mL)
Store at room temperature.

Foire aux questions (FAQ)

What is the difference between TOP10 and TOP10F' cells?

The only difference between TOP10 and TOP10F' cells is that the latter contain the F' episome that carries the tetracycline resistance gene and allows isolation of single-stranded DNA from vectors that have an f1 origin of replication. The F' episome also carries the lacIq repressor for inducible expression from trc, tac, and lac promoters using IPTG. TOP10F' cells require IPTG induction for blue/white screening.

I am trying to clone an insert that is supposedly pretty toxic. I used DH5? and TOP10 cells for the transformation and got no colonies on the plate. Do you have any suggestions for me?

If the insert is potentially toxic to the host cells, here are some suggestions that you can try:

- After transforming TOP10 or DH5? cells, incubate at 25-30°C instead of 37°C. This will slow down the growth and will increase the chances of cloning a potentially toxic insert.
- Try using TOP10F' cells for the transformation, but do not add IPTG to the plates. These cells carry the lacIq repressor that represses expression from the lac promoter and so allows cloning of toxic genes. Keep in mind that in the absence of IPTG, blue-white screening cannot be performed.
- Try using Stbl2 cells for the transformation.

Can I directly clone, propagate and express in BL21 without using TOP10?

It is imperative that a cloning strain such as TOP10 be used for characterization of the plasmid, propagation, and maintenance. BL21 cells are wild-type for endA and recA, which could result in poor miniprep quality and a greater chance of plasmid rearrangements due to recombination. In addition, BL21 cells contain the T7 RNA polymerase gene which is expressed at low levels even in the absence of inducer. If the gene is toxic to E. coli, plasmid instability and/or cell death can result.

I need to clone unmethylated DNA from a PCR reaction using a strain that has the hsdRMS mutation to avoid restriction after transformation. Is TOP10 suitable for my purposes?

Yes, TOP10 has the hsdRMS mutation, so this strain can be used to clone DNA from PCR reactions and other non-methylated sources. hsdRMS is a mutation in the system that E. coli uses to recognize foreign DNA. There are two parts to this system, methylation and restriction. E. coli methylate DNA at certain sequences, and if the DNA is not methylated at these sequences it will be recognized as foreign and restricted. Thus, if unmethylated DNA is transformed into E.coli that does not carry the hsdRMS genotype, it is recognized as foreign and enzymatically degraded.

Are TOP10 cells lacIq+ (plus) or lacIq- (minus)? That is, do they produce the lambda lacIq repressor protein?

TOP10 cells are lacIq- (minus). They do not have the lacIq gene and therefore do not produce the lacIq repressor protein. lacIq is most commonly found on an F' episome, and therefore is present in TOP10F', JM101, JM109, and NM522 strains.