BODIPY™ FL-X NHS Ester (Succinimidyl Ester)

Le colorant BODIPY™ FL-X est un colorant vert brillant et fluorescent dont l’excitation et l’émission sont similaires à celles de la fluorescéine (FITC) ou du colorant Alexa Fluor™ 488. Il présente un coefficient d’extinction élevé et un rendement quantique de fluorescence et est relativement insensible à la polarité du solvant et au changement de pH. Contrairement aux fluorophores hautement solubles dans l’eau, le colorant Alexa Fluor™ 488 et aux colorants fluorescéine (FITC), les colorants BODIPY™ ont des propriétés hydrophobes uniques, idéales pour la coloration des lipides, des membranes et d’autres composés lipophiles. Le colorant BODIPY™ FL-X a une durée de vie à l’état excité relativement longue (généralement 5 nanosecondes ou plus), ce qui est utile pour les dosages à base de polarisation de fluorescence et une grande section transversale à deux photons pour l’excitation multiphotonique. En plus des formulations de colorants réactifs, nous proposons le colorant BODIPY™ FL-X conjugué à une variété d’anticorps, de peptides, de protéines, de traceurs, et substrats d’amplification optimisés pour le marquage et la détection cellulaires (en savoir plus).

L’ester NHS (ou ester succinimidylique) de BODIPY™ FL-X est l’outil le plus apprécié pour conjuguer ce colorant à une protéine ou à un anticorps. Les esters NHS peuvent être utilisés pour marquer des amines primaires (R-NH₂) de protéines, d’oligonucléotides modifiés par des amines et d’autres molécules contenant des amines. Les conjugués BODIPY™ FL-X qui en résultent présentent une fluorescence brillante, des bandes passantes à émission étroite et des durées de vie à l’état excité relativement longues qui peuvent être utiles pour les dosages de polarisation de fluorescence et la microscopie par excitation à deux photons (TPE).

Ce colorant réactif contient un espaceur d’aminohexanol de sept atomes (X) entre le fluorophore et le groupe ester NHS. Cette entretoise permet de séparer le fluorophore de son point d’attache, ce qui peut réduire l’interaction du fluorophore avec la biomolécule à laquelle il est conjugué.

Informations détaillées concernant cet ester NHS BODIPY™ FL-X :

Marquage fluorophore : Colorant BODIPY™ FL-X
Groupe de réactifs : Ester NHS (ester succinimidyle)
Réactivité : Amines primaires sur des protéines et des ligands, oligonucléotides modifiés par des amines
Ex/Em du conjugué : 504/510 nm
Coefficient d’extinction : 85 000 cm-1M-1
Poids moléculaire : 502.32

Réaction de réticulation type
Les réactifs réagissant aux amines peuvent être conjugués avec pratiquement n’importe quelle protéine ou peptide (le protocole fourni est optimisé pour des anticorps IgG). La taille de la réaction peut être adaptée à n’importe quelle quantité de protéine, mais la concentration de la protéine doit être d’au moins 2 mg/ml pour des résultats optimaux. Nous recommandons d’essayer trois degrés différents de marquage, en utilisant trois rapports molaires différents du réactif sensible à la protéine.

L’ester NHS BODIPY™ est typiquement dissolu dans du diméthylformamide (DMF) ou du diméthylsulfoxyde (DMSO) anhydre de haute qualité et la réaction est effectuée dans un tampon de bicarbonate de sodium de 0,1 à 0,2 M, de pH 8,3 et à température ambiante pendant 1 heure. Parce que le pKa de l’amine terminale est inférieur à celui du groupe amino-epsilon de lysine, vous pouvez atteindre un marquage plus sélectif de l’extrémité de l’amine en utilisant un tampon proche du pH neutre.

Purification de conjugués
Les anticorps marqués sont typiquement séparés du colorant BODIPY™ à l’aide d’une colonne de filtration sur gel, comme la colonne Sephadex™ G-25, la colonne BioGel™ P-30 ou une colonne équivalente. Pour des protéines beaucoup plus grandes ou plus petites, sélectionnez un milieu de filtration sur gel ayant un seuil de poids moléculaire approprié ou purifiez par dialyse. Nous proposons plusieurs kits de purification optimisés pour différentes quantités de conjugués d’anticorps :
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 0,5 à 1 mg (A33086)
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 20 à 50 µg (A33087)
kit de purification de conjugués d’anticorps pour 50 à 100 µg (A33088)

En savoir plus sur le marquage des protéines et des anticorps
Nous offrons une large sélection de kits de marquage d’anticorps et de protéines de Molecular Probes™ pour convenir à votre produit de départ et à votre configuration expérimentale. Consultez nos kits de marquage d’anticorps ou utilisez notre outil de sélection de chimie de marquage pour d’autres choix. Pour en savoir plus sur nos kits de marquage, lisez Kits de marquage des protéines et des acides nucléiques, section 1.2 dans le manuel Molecular Probes™.

Nous vous préparerons un conjugué sur mesure
Si vous ne trouvez pas ce que vous cherchez dans notre catalogue en ligne, nous vous préparerons un conjugué d’anticorps ou de protéines sur mesure. Notre service de conjugaison personnalisé est efficace et confidentiel, et nous croyons en la qualité de notre travail. Nous sommes certifiés ISO 9001:2000.