EnzChek™ Direct Phospholipase C Assay Kit

Ce kit permet de surveiller en continu l’activité phospholipase C (PLC) spécifique à la phosphotidyl choline dans les dosages biochimiques à base de microplaques. Le dosage utilise un substrat fluorogénique sélectif PCL qui émet une émission vert vif lors du clivage.

Le kit de dosage EnzChek™ Direct Phospholipase C fournit une méthode simple et robuste pour surveiller l’activité du PC-PLC. Chaque kit fournit suffisamment de réactifs pour 2 microplaques, en utilisant des volumes de 200 µl dans un format de 96 puits. PC-PLC joue un rôle crucial dans de nombreuses voies de signalisation cellulaire impliquées dans l’apoptose et la survie cellulaire et dans des maladies allant du cancer au HIV1-7. Le dosage utilise un glycérophospho-éthanolamine avec une chaîne acyle sn-2 marquée par un colorant comme substrat pour PC-PLC. Clivage du substrat par PC-PLC avant que le phosphate ne libère le diacylglycérol marqué par le colorant, qui produit un signal de fluorescence positif qui peut être mesuré en continu. Le produit de réaction présente une absorption et une émission de fluorescence maximales de 509 nm et 516 nm, respectivement. En utilisant une enzyme purifiée de Bacillus cereus, le dosage peut détecter au minimum 10 mU⁄ml de PC-PLC au bout d’une heure à température ambiante. Le kit s’est avéré utile pour caractériser l’inhibition du PC-PLC et, étant donné qu’il offre une mesure directe, le potentiel de faux positifs dans une sélection de composés est éliminé.