EnzChek™ Phospholipase A2 Assay Kit
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EnzChek™ Phospholipase A2 Assay Kit

Ces kits utilisent notre dosage autonome de la phospholipase A2, PLA2 (A10072) et associent l’Ez et les lipides nécessaires pourAfficher plus
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RéférenceQuantité
E102171 kit
Référence E10217
Prix (EUR)
473,00
Each
Quantité:
1 kit
Prix (EUR)
473,00
Each
Ces kits utilisent notre dosage autonome de la phospholipase A2, PLA2 (A10072) et associent l’Ez et les lipides nécessaires pour réaliser deux dosages complets sur microplaques de 96 puits qui surveillent l’activité dans les préparations d’enzymes purifiées et les lysats cellulaires. Le kit EnzChek de la phospholipase A2 contient suffisamment de réactifs pour deux microplaques, en utilisant des volumes de 200 µl avec 96 puits pour effectuer une surveillance fluorimétrique continue de la PLA2. Ce produit constitue une alternative à notre réactif (B7701), (bis-BODIPY® FL C11-PC), en proposant un substrat sélectif de la PLA2 et un réactif ratiométrique, réduisant ainsi les variations produites par les instruments et les conditions de dosage. La phospholipase A2 ou la PLA2 représente une gamme enzymatique qui hydrolyse la liaison sn-2 ester des phospholipides. Les activités de ces enzymes jouent un rôle important dans les troubles cardiovasculaires, inflammatoires et du système nerveux et dans les cancers. Le substrat de phospholipase A2 EnzChek® assure une surveillance en temps réel sensible, continue et rapide des activités enzymatiques de la PLA2. Ce substrat unique, sélectif pour la PLA2, peut être utilisé en mode de détection par intensité ou par ratiométrie. En mode de détection par intensité, l’activité de la PLA2 est surveillée par l’augmentation d’intensité d’une seule longueur d’onde à environ 515 nm. Avec l’analyse ratiométrique, qui repose sur l’émission par transfert d’énergie de fluorescence par résonance (FRET) de ce substrat avant et après clivage, la PLA2 est détectée par les changements de rapport d’intensité d’émission à 515/575 nm avec une excitation à ≈ 460 nm. N’importe quel mode de détection constitue une méthode simple avec peu de bruit de fond, une sensibilité élevée et une forte spécificité à la PLA2.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Méthode de détectionIntensité de fluorescence, Fluorescent
Type de colorantBODIPY™ FL
Type de filtreFiltre FITC (fluorescéine)
Quantité1 kit
Conditions d’expéditionTempérature ambiante
Propriétés du substratSubstrat à base de lipides, substrat chimique
Type de substratSubstrat de phospholipase
Enzyme ciblePhospholipase
CouleurMélange, vert
EmissionRatiométrique : 460-490 ⁄ 515, 575, basé sur l’intensité : 460-490⁄515
À utiliser avec (application)Dosage de la phospholipase
À utiliser avec (équipement)Lecteur de microplaques, Lecteur de microplaques
Gamme de produitsEnzChek, Molecular Probes
Type de produitDosage de la phospholipase
Unit SizeEach
Contenu et stockage
1 kit.Conserver le kit à <-20°C, à l’abri de la lumière, desséché

Foire aux questions (FAQ)

What is the LoD for the EnzChek Phospholipase A2 Assay Kit (Cat. No. E10217)?

The EnzChek Phospholipase A2 Assay Kit (Cat. No. E10217) can detect PLA2 at 0.05 U/mL or lower.

The FRET-based substrate Red/Green BODIPY PC-A2 shows no change in fluorescence upon enzymatic cleavage. I'm not seeing an increasing green signal with higher concentrations of phospholipase A2 and no change in red fluorescence. Why is this?

There are numerous factors that can interfere with FRET-based detection. Here are a few items to consider:

a) Is there any component in the reaction solution that can quench green fluorescence?
b) Is there any component in the reaction solution that autofluoresces in the green or red emission range?
c) Too high of a substrate concentration may result in diffusional FRET: Lower the final working concentration of the substrate.
d) Ensure adequate dispersal of the substrate during the reaction. BODIPY dyes are very hydrophobic, and aggregates of the green product, BODIPY FL, can form an excimer and emit in the red range.

Find additional tips, troubleshooting help, and resources within our Cell Analysis Support Center.

You provide Phospholipase A2 from honey bee venom in the EnzChek Phospholipase A2 Assay Kit. Can the kit be used with phospholipase A2 from other species?

Yes, phospholipase A2 from other species may be used as long as the phospholipase A2 can hydrolyze the sn-2 ester linkage of phospholipids and the enzymatic reaction can be done within a pH of >3 and <9.

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Citations et références (3)

Citations et références
Abstract
Crystal structure of the predicted phospholipase LYPLAL1 reveals unexpected functional plasticity despite close relationship to acyl protein thioesterases.
Authors:Bürger M, Zimmermann TJ, Kondoh Y, Stege P, Watanabe N, Osada H, Waldmann H, Vetter IR,
Journal:J Lipid Res
PubMed ID:22052940
'Sequence homology indicates the existence of three human cytosolic acyl protein thioesterases, including APT1 that is known to depalmitoylate H- and N-Ras. One of them is the lysophospholipase-like 1 (LYPLAL1) protein that on the one hand is predicted to be closely related to APT1 but on the other hand might ... More
Alterations in cerebrospinal fluid glycerophospholipids and phospholipase A2 activity in Alzheimer's disease.
Authors:Fonteh AN, Chiang J, Cipolla M, Hale J, Diallo F, Chirino A, Arakaki X, Harrington MG,
Journal:
PubMed ID:23868911
'Our aim is to study selected cerebrospinal fluid (CSF) glycerophospholipids (GP) that are important in brain pathophysiology. We recruited cognitively healthy (CH), minimally cognitively impaired (MCI), and late onset Alzheimer''s disease (LOAD) study participants and collected their CSF. After fractionation into nanometer particles (NP) and supernatant fluids (SF), we studied ... More
Group V secretory phospholipase A2 plays a pathogenic role in myocardial ischaemia-reperfusion injury.
Authors:Yano T, Fujioka D, Saito Y, Kobayashi T, Nakamura T, Obata JE, Kawabata K, Watanabe K, Watanabe Y, Mishina H, Tamaru S, Kugiyama K,
Journal:Cardiovasc Res
PubMed ID:21169294
Group V secretory phospholipase A(2) (sPLA(2)-V) is highly expressed in the heart. This study examined (i) the role of sPLA(2)-V in myocardial ischaemia-reperfusion (I/R) injury and (ii) the cooperative action of sPLA(2)-V and cytosolic PLA(2) (cPLA(2)) in myocardial I/R injury, using sPLA(2)-V knockout (sPLA(2)V(-/-)) mice. Myocardial I/R injury was created ... More