EnzChek™ Caspase-3 Activity Assay Kits

Permet une détection simple et fiable de l’apoptose médiée par l’activité de la caspase 3 grâce au kit de dosage d’activité de la caspase 3 EnzChek, qui tire parti de substrats spécialement conçus pour la fluoresce lors du clivage par l’enzyme caspase 3. Le kit de dosage d’activité de la caspase 3 EnzChek est disponible avec le substrat Z-DEVD-AMC ou Z-DEVD-R110, qui produit une fluorescence brillante lors du clivage protéolytique par les caspases 3 et 7.

Le kit de dosage d’activité de la caspase 3 EnzChek permet la détection de l’apoptose en fournissant une méthode simple et fiable pour le dosage de l’activité des caspases 3 et 7. Le kit peut être utilisé pour mesurer en permanence l’activité des caspases 3 et 7 dans les extraits cellulaires et les préparations enzymatiques purifiées, à l’aide d’un fluoromètre ou d’un lecteur de microplaques à fluorescence.

Les principales caractéristiques du kit de dosage d’activité de la caspase 3 EnzChek comprennent :
• Dosage par fluorescence qui utilise les paramètres standard d’excitation/émission de fluorescéine (FITC)
• Format permettant la mesure continue de l’activité des caspases 3 et 7 dans les extraits cellulaires
• Contrôles fluorescents et enzymatiques inclus

Le substrat dérivé de l’aminométhylcoumarine (AMC) (Z-acide aspartique-acide glutamique-valine-acide aspartique (DEVD)-AMC) inclus dans le kit de dosage d’activité de la caspase 3 EnzChek est faiblement fluorescent dans la plage UV (maxima d’excitation/émission ˜330/390 nm), mais produit une fluorescence bleu vif (maxima d’excitation/émission ˜342/441 nm) lors du clivage protéolytique. Le kit peut être utilisé pour mesurer en continu l’activité de la caspase 3 et des protéases étroitement liées dans les extraits cellulaires et les préparations enzymatiques purifiées, à l’aide d’un fluoromètre ou d’un lecteur de microplaques à fluorescence.

Le substrat dérivé de rhodamine 110 (Z-DEVD-R110) utilisé avec ce kit de dosage d’activité de la caspase 3 EnzChek est un composé de bisamide non fluorescent qui, lors du clivage enzymatique, est converti en deux étapes en monoamide fluorescent, puis en produit R110 encore plus fluorescent. Ces deux produits d’hydrolyse présentent des propriétés spectrales similaires à celles de la fluorescéine, avec des longueurs d’onde d’excitation et d’émission maximales respectives de 496 nm et 520 nm.

Outre les substrats, le kit de dosage d’activité des caspases EnzChek contient l’inhibiteur réversible de l’aldéhyde Ac-DEVD-CHO, ainsi qu’une norme de référence AMC ou R110. L’inhibiteur Ac-DEVD-CHO confirme que les signaux de fluorescence dans les populations de cellules induites et témoins sont dus à l’activité des protéases caspases 3 et 7. La norme de référence permet de quantifier la quantité d’AMC ou de R110 libérée dans la réaction.