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Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)
Thermo Scientific™

Klenow Fragment, exo– (5 U/μL)

Le fragment de Klenow Thermo Scientific, exo-, est le long fragment de l’ADN Polymérase I. Il présente une activité polyméraseAfficher plus
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RéférenceQuantité
EP0421300 U
EP04221500 U
Référence EP0421
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Quantité:
300 U
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Le fragment de Klenow Thermo Scientific, exo-, est le long fragment de l’ADN Polymérase I. Il présente une activité polymérase 5′ → 3′ sans l’activité exonucléase 3′ → 5′ et 5′ → 3′ de l’ADN Polymérase I. L’activité exonucléase 3’ → 5’ de l’enzyme est éliminée par des mutations dans le site actif d’exonucléase 3’ → 5’.

Points clés

• Sans activité exonucléase 3’ → 5’ 
• Incorpore des nucléotides modifiés (par ex., nucléotides marqués par Cy3, Cy5, de la fluorescéine-, de la rhodamine-, de l’aminoallyl ou de la biotine)
• Actif dans les tampons d’enzymes de restriction, de PCR et de RT

Applications
• Marquage aléatoire de l’ADN
• Marquage par remplissage en saillies de 5’ d’ADN double brin
• Amplification du déplacement des brins (SDA)
• Séquençage de l’ADN avec la méthode Sanger

Remarque

Le fragment de Klenow, exo-, n’est pas recommandé pour les réactions de troncature de l’ADN avant une ligature de l’ADN, car il ajoute souvent au moins un nucléotide supplémentaire à l’extrémité 3 des substrats d’ADN à extrémités tronquées indépendamment de la matrice.
Usage exclusivement réservé à la recherche. Ne pas utiliser pour des procédures de diagnostic.
Spécifications
Tampon compatibleEnzyme de restriction, PCR, tampon RT
PolyméraseADN polymérase I
Type de produitFragment Klenow
Quantité300 U
Concentration5 U / μl
Unit SizeEach

Foire aux questions (FAQ)

What are the differences between Thermo Scientific DNA Polymerase I, Klenow Fragment, and Klenow Fragment (exo-)?

Thermo Scientific DNA Polymerase I possesses 5′?3′ DNA synthesis activity, 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, and 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment is the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity and 3′?5′ exonuclease (proofreading) activity, but lacks 5′?3′ exonuclease activity. Klenow Fragment, exo-, is also the large fragment of DNA polymerase I. It exhibits 5′?3′ polymerase activity, but lacks the 3′?5′ and 5′?3′ exonuclease activities.

What conditions are optimal for fill-in reactions using Klenow (Large fragment of DNA Polymerase)?

Klenow can be used to "fill in" 5' overhangs of double-stranded DNA fragments using common restriction endonuclease buffers. We recommend REact 2 buffer (1X concentration is 50 mM Tris-HCl pH 8, 50 mM NaCl, 10 mM MgCl2) , but other buffers will also work.

Fill-in Reaction Conditions:

1. Dilute Large Fragment of DNA Polymerase I to 0.5 U/µL with Klenow Dilution Buffer.
2. To a 1.5-mL microcentrifuge tube on ice, add: 10X REact 2 Buffer - 3 µL, 0.5 mM dATP - 1 µL, 0.5 mM dCTP - 1 µL, 0.5 mM dGTP - 1 µL, 0.5 mM dTTP - 1 µL, DNA 0.5-1 µg, Large fragment of DNA Polymerase I - 1 µL, Autoclaved distilled water to 30 µL.
3. Mix gently and centrifuge briefly to bring the contents to the bottom of the tube.
4. Incubate at room temperature for 10-15 minutes or 20 minutes on ice.
5. Terminate fill-in reaction by phenol extraction.

To label the DNA fragment, use 1-2 µL of [alpha-32P]dNTP (400 Ci/mmol, 10 mCi/mL) (24-48 pmoles) instead of the corresponding cold dNTP.

Note: Thermo Fisher Scientific also offers an Exo minus Klenow, which is provided with its own buffers.